CD28检测试剂（流式细胞仪法）

流式细胞仪检测细胞凋亡方法(Annexin V 法)

V-FITC(Cat. No. 65874X)            PI(Cat. No. 66211E) Annexin V-PE(Cat. No. 65875X)                7-AAD(Cat. No. 34321X)   实验设备   1. 一次性12×75mm Falcon试管。 2. 微量加样器和加样头。 3. FACS流式细胞仪：上样检测。 4. CELLQuest软件

细胞凋亡试验常用的方法（MTT法、荧光法、DNA琼脂糖凝胶电泳法与流式细胞仪检测法）

固定1h，PBS洗2次，再用1%锇酸固定1h，丙酮酸梯度脱水。细胞用树脂包埋，并进行超薄切片，用醋酸钠-枸橼酸铅染色，透射电镜下观察凋亡的细胞形态，可见有染色质浓集，不均匀分布，考核周边形成有核膜包裹的断裂核碎片，呈新月形凋亡小体，并选择典型切片图像摄影。（五）流式细胞仪检测法：1、原理：处于增殖周期中的细胞，根据其所处不同周期时相其DNA含量分布在2n-4n之间，发生凋亡的细胞内与核内DNA裂解成许多小片断，用细胞膜通透法可使小分子量的DNA片断穿过薄膜而丢失，仅剩下大分子量DNA片断，这些失去部分

流式实验如何配色？

细胞类型中，相应抗原的表达量，可以粗略地将抗原分子分为三类： 1. 很容易鉴定、容易区分阴阳性细胞群、阴阳性峰明显分开的抗原。例如：CD3，CD4，CD19 等。 2. 很容易鉴定、较高水平表达、经常连续性表达。例如：CD27，CD28，CD45RA, CD45RO 等。 3. 低水平表达、激活性 Marker、未知但关键。例如：CD25，STAT5，Foxp3 等。 表达量的强弱，可以参考厂家的质检结果，但更多地需要参考文献里具体细胞群体的表达。 第三步、了解实验所用流式细胞仪的配置