快速去基因组逆转录预混液

逆转录、qPCR 实验还出错？这几点你可能没注意！

成功做完了逆转录，这时候可能有些疲累了。筛引物、做定量的时候要加样的孔也较多，即使使用了 qPCR 预混液，也有加错样的可能发生。诺唯赞的 ChamQTM SYBR® Color qPCR Master Mix 系列（Q411 /Q421 /Q431 /Q441）提供不同颜色的试剂，利用移液过程中的变色效应，追踪移液过程，可以极大的减少移液错误。 引物设计有原则 在使用 SYBR 染料法时，引物设计需遵循以下原则：引物长度 18～25bp，产物长度 80～300bp，GC 含量 40～60

教您正确选择逆转录酶，适用 6 种不同应用

的动态范围或线性度最佳，可确保基因表达定量的准确性。 所选试剂在扩增过程中应产生较高且一致的 cDNA 得率，以获得具有高灵敏度和低变异性的基因表达结果。可考虑预混液形式的逆转录酶用以可以减少实验误差。 RT-qPCR 的一个特殊程序是从未经 RNA 分离的粗细胞裂解物直接进行逆转录。在使用稀缺样本或选用群体内特定细胞的实验，可考虑使用直接 RT-qPCR 法来防止可能的样本损失和低 RNA 回收。 cDNA 克隆和文库构建 cDNA 文库可由代表特定样本中转录序列的 cDNA 克隆组成

真香！用 qPCR 做外泌体研究，南京医科大学拿下 41 分 SCI

。 2）RNA 提取 外泌体 RNA 可以用专用的外泌体 RNA 提取试剂盒提取，也可以用 Trizol 法提取，建议 Trizol 与外泌体的体积比不小于 4:1（也可以用 Trizol 直接裂解外泌体沉淀）。 具体操作：取 200 μl 外泌体于 1.5 ml EP 管中，加入 800 μl Trizol 试剂，充分混合，裂解 10 min，12000 rpm 离心 10 min 取上清。 3）反转录 采用 Umibio 4× 预混型快速逆转录试剂盒：适用于长片段 RNA（如 mRNA、LncRNA