一管式逆转录预混液（适合PCR）

逆转录、qPCR 实验还出错？这几点你可能没注意！

成功做完了逆转录，这时候可能有些疲累了。筛引物、做定量的时候要加样的孔也较多，即使使用了 qPCR 预混液，也有加错样的可能发生。诺唯赞的 ChamQTM SYBR® Color qPCR Master Mix 系列（Q411 /Q421 /Q431 /Q441）提供不同颜色的试剂，利用移液过程中的变色效应，追踪移液过程，可以极大的减少移液错误。 引物设计有原则 在使用 SYBR 染料法时，引物设计需遵循以下原则：引物长度 18～25bp，产物长度 80～300bp，GC 含量 40～60

荧光定量 PCR——想要实验结果可靠，各种对照不可少

发生扩增。如果检测到扩增，则样本中可能含有未去除干净的 DNA。 阴性样本对照 Negative Sample Control 阴性样本指不含有目的基因或者靶序列的样本，也可以是样本保存液。从核酸提取开始做起，经历提取、逆转录（如有）和扩增过程。如果出现扩增，则说明其中某一实验步骤中存在污染，结合 NTC 结果，可以判断是否是样本提取过程中引入的污染。 阳性对照 荧光定量 PCR 实验从样本采集到最后的结果分析分为几个步骤完成，任何一个环节出现问题，都会对结果产生影响。当出现一个无扩增

教您正确选择逆转录酶，适用 6 种不同应用

的动态范围或线性度最佳，可确保基因表达定量的准确性。 所选试剂在扩增过程中应产生较高且一致的 cDNA 得率，以获得具有高灵敏度和低变异性的基因表达结果。可考虑预混液形式的逆转录酶用以可以减少实验误差。 RT-qPCR 的一个特殊程序是从未经 RNA 分离的粗细胞裂解物直接进行逆转录。在使用稀缺样本或选用群体内特定细胞的实验，可考虑使用直接 RT-qPCR 法来防止可能的样本损失和低 RNA 回收。 cDNA 克隆和文库构建 cDNA 文库可由代表特定样本中转录序列的 cDNA 克隆组成