高效RIPA裂解液/细胞快速裂解液(带附件:PMSF 1.5

献给初学者：手把手教你做免疫共沉淀实验

免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。 注意：在准备做磷酸（酯）酶实验的时候，不加磷酸酯酶抑制剂。 一、工作液配制 配制 100 ml 的 modified RIPA buffe： 1.称取 790 mg 的 Tris-Base，加到 75 ml 去离子水中，加入 900 mg 的 NaCl，搅拌

Western 实验步骤

样本准备 蛋白提取 所需仪器：匀浆器、RIPA 裂解液、PMSF（蛋白酶抑制剂）、磷酸酶抑制剂、剪刀、镊子，消毒酒精棉、PBS、移液器、离心机。 裂解液配制——RIPA 裂解液：PMSF=100：1。 1） 组织处理：首先用酒精棉消毒剪刀和镊子，取适量的组织于匀浆器中，用剪刀剪碎加适量的裂解液冰水中匀浆 1-4 min。匀浆结束后吸取溶液于 EP 管中保存备用。（含血液较多的组织可先用 PBS 清洗后再匀浆） 2） 细胞处理： A、 贴壁细胞处理：去掉培养基用 PBS 清洗后加入适量的裂解液

Zymolyase (3mg/ml)

Zymolyase Dissolve in 10% glucose. Store aliquots (25 µl) at 20o C in common freezer for stock solutions Use once and dispose Comments: alternative is to dissolve in SCE, 40% gycerol, 20 mg/ml final. Can use