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- 北京
- 2025年07月11日
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99
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北京诺博莱德科技有限公司
凝固血液基因组DNA提取试剂盒（溶液型）
目录号:40311
产品内容：
|
产品成份 |
40311-320 （320 次x 50μl） |
|
细胞核裂解液 |
180 ml |
|
蛋白沉淀液 |
70 ml |
|
Glycogen |
0.7 ml |
|
蛋白酶 K 溶液 |
1 ml |
|
DNA 溶解液 |
30 ml |
自备试剂：
异丙醇、70％乙醇
保存条件：
室温（15~25℃）
产品简介：
适用于从凝固血液样本中快速提取高质量的基因组DNA。
首先细胞核裂解液配合蛋白酶K裂解凝固血块释放出基因组DNA， 然后蛋白沉淀液选择性沉淀去除蛋白，最后纯净的基因组DNA在Sigma的分子生物学级Glycogen的助沉下通过异丙醇沉淀并重溶解于DNA溶解液。
产品特点：
1. 简便快速：30 min 内可获得高纯度的基因组 DNA。
2. 安全无毒：无需苯酚/氯仿抽提。
3. 高产：典型的产量 1 ml 全血可提取出 10～30µg 基因组 DNA。
4. 高纯：OD260/280=1.7～1.9，长度可达 50～150 kb，可直接进行可直接用于构建文库、PCR、、酶切、Southern-blot 等分子生物学实验。
注意事项：
1. 本试剂盒可运用于多种抗凝剂的全血，如 EDTA、柠檬酸、肝素抗凝血。其中由于肝素抗凝血的白细胞沉淀团很难打散重悬，影响裂解效果，建议选用非肝素的抗凝剂收集血液标本。
2. 为了最佳效果，最好使用新鲜血液标本或者4℃存放少于3天的标本，不要使用反复冻融超过3次的标本，否则会严重降低产量。
3. 不同样品尤其疾病样品中白细胞数量差异可能非常大，血液DNA产量的个体差异也可能非常大。
4. 如果结合液CB、抑制物去除液IR有沉淀析出，可在37℃水浴溶解，摇匀后使用。
5. 本试剂盒为溶液型，可以很容易的按照比例扩大或者缩小每次处理的全血量（20µl-10ml），请联系我们索取其它处理量的操作手册。
6. DNA溶解液是TE缓冲液洗脱（10mM Tris-HCl，1mM EDTA，pH 8.0），长期保存DNA，但是EDTA可能下游酶切反应，使用时可以适当稀释。也可以使用水洗脱，但应该确保批pH大于7.5， pH过低影响洗脱效率。用水洗脱DNA应该保存在－20℃。
操作步骤：
1. 加入■50μl 凝固血液至一个 1.5ml 离心管或◆1ml 凝固血液至一个
50ml 离心管，剧烈涡旋或者用手剧烈拍打离心管帮助打散凝血块。
2. 加入■550μl 或◆11ml 细胞核裂解液，吹打混匀，再加入■3μl 或◆
60μl 蛋白酶 K(20mg/ml)，颠倒混匀 25 次。
3. 55℃放置 3 小时至过夜，直到所有的凝块完全融解。
4. 可选步骤（一般不需要做）：加入■3μl 或◆60μl RNase A（4mg/ml），在裂解物中加入 RNase A（10mg/ml）至终浓度 30μg/ml，颠倒 25 次混匀，37℃温育 15 分钟去除残留RNA。
5. 将裂解物迅速冷却到室温（可置冰上一分钟）。
6. 加入■200μl 或◆4ml 蛋白沉淀液，在涡旋振荡器上高速连续振荡混匀
25 秒，混匀后可能见到一些小的蛋白团块。
注意：液体确实要旋转着振荡起来，而不仅仅是上下振动，这样混匀效果和沉淀蛋白效果最佳。
7. 置冰上■5 分钟 或◆10 分钟。
8. ■13,000-16,000 x g 离心 5 分钟或◆2,500 x g(可根据需要调整加大离心力)离心 10 分钟。这时候应该可以见到管底暗褐色的蛋白沉淀，也可能见到一些蛋白沉淀漂浮在液体表面。
9. 小心吸取上清到一个新的■1.5ml 离心管 或◆50ml 离心管中。
注意：吸取上清时，注意不要吸到管底的和漂浮在液体表面的蛋白沉淀。如果不小心将蛋白沉淀转入新的离心管中，可再次离心 2 分钟后取上清。
10.加入■600μl 的室温异丙醇和 1μl Glycogen 溶液或◆12ml 室温异丙醇和 20μl Glycogen 溶液，轻柔颠倒 50 次混匀或者直到出现棉絮状（丝状）白色 DNA 沉淀。（注意：处理样品量大的时候才可能看见丝状沉淀，
处理样品量少或者保存质量不好的时候往往看不见。）
11. ■13,000-16,000 x g 离心 1 分钟或◆2,500 x g 离心 3 分钟，这时候应该看到管底白色的 DNA 沉淀。
12. 小心弃上清，倒置后在吸水纸上轻敲几下以控干残留乙醇（注意不要丢失沉淀）。
13.加入■600μl 或◆12ml 70%乙醇，颠倒几次漂洗DNA 沉淀。
14. ■13,000-16,000 x g 离心 1 分钟或◆2,500 x g 离心 1 分钟, 倒去上清
（沉淀很松，注意不要把DNA 沉淀倒掉了），倒置后在吸水纸上轻敲几下以控干残留乙醇，还可以用枪头小心吸掉管底沉淀周围和管壁的残留乙醇，空气晾干沉淀几分钟。
注意：不要干燥过头，否则 DNA 极其难溶；也不能残留太多乙醇，否则乙醇可能抑制下游如酶切反应。
15.加入■20μl 或◆250-400μl TE 缓冲液(或者客户根据需要选择的缓冲液)重新水化溶解DNA 沉淀，轻弹管壁混匀，可以放置在 65℃温育 30-60分钟（不要超过一小时），也可以在室温或者 4℃放置过夜来重新水化 DNA，中间不时的轻弹管壁帮助重新水化 DNA。
16. DNA 可以存放在 2-8℃,如果要长时间存放，可以放置在－20℃。
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文献和实验柱（DP1801）的提取纯度高一些，但是处理量小（0.1-1ml）、得率略低；溶液型 (DP2101或DP2201)的提取量大（1-10ml）得率也高于离心柱。医院的血液标本一般在2ml以上，一般选择溶液型的方法提取.在说到国产和 进口差别的时候，很多人以为进口一定比国产的好，我们觉得没有最好，只有更好！在不断的进行试验优化之后，全血基因组DNA提取试剂盒DP2101或 DP2201开创了第三代技术，不需要蛋白酶K消化，进口的都是要借助蛋白酶K的啊！DP2101或DP2201减少了蛋白酶K现配现用
2101或DP2201)的提取量大（1-10ml）得率也高于离心柱。医院的血液标本一般在2ml以上，一般选择溶液型的方法提取.在说到国产和进口差别的时候，很多人以为进口一定比国产的好，但是实际上如何呢？只有通过尝试才知道，况且进口的产品价位并不亲民。在不断的进行试验优化之后，全血基因组DNA提取试剂盒DP2101或DP2201开创了第三代技术，不需要蛋白酶K消化，进口的都是要借助蛋白酶K的啊（本品采用纯化学试剂裂解）。DP2101或DP2201减少了蛋白酶K现配现用的麻烦和消化的时间，而且提取量和稳定
这周讨论一项常用的技术，即使常用但仍引起部分人核酸分离焦虑症。那就是基因组DNA的纯化去杂质。 场景是这样的：你有一份采自南太平洋中部一个偏僻小岛上首次发现的古老兰花品种根际土壤样品。你使用了非PowerSoil Kit法提取其中的微生物DNA。最终DNA含有太多杂质，无法PCR扩增。因此需要去除腐植酸等PCR抑制因子。你需要所有的核酸分子通过全基因组鸟枪测序……怎么办？ 你致电MO BIO说了你的大概情况，而我们推荐了使用PowerClean Kit
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