- ￥860 - 1500
- Arcegen
- C331308
- 美国
- 2026年03月29日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
现货
- 英文名：
Calcein-AM/PI Double Stain Kit
- 保质期：
一年
- 供应商：
魔兜儿
- 保存条件：
A 组分和 B 组分需-20℃避光干燥保存 ，C 组分-20℃保存
- 规格：
500T/1000T
| 规格： | 500T | 产品价格： | ￥860.0 |
|---|---|---|---|
| 规格： | 1000T | 产品价格： | ￥1500.0 |
产品简介
Calcein-AM/PI Double Stain Kit 活死细胞双染试剂盒主要通过两种染料 Calcein-AM 和 PI 对细胞进行活死 鉴别。
Calcein-AM 是一种对活细胞进行荧光标记的细胞染色试剂，发绿色荧光（Ex=490 nm, Em=515 nm）。它 穿透细胞膜进入细胞后能够被细胞内的酯酶剪切形成 Calcein ，从而被滞留在细胞内 ，发出强绿色荧光。
因其在传统的 Calcein（钙黄绿素）基础上引入乙酰甲氧基甲酯（AM）基团 ，增加了疏水性 ，它能够更轻 易穿透活细胞膜。与其它同类试剂（如 BCECF-AM 和 CFDA)相比 ，由于 Calcein-AM 细胞毒性极低 ，是最 适合用于活细胞染色的荧光探针 ，且不会抑制任何细胞功能 ，如细胞增殖和淋巴球的趋化性。死细胞缺乏 酯酶活性 ，因此 ，Calcein-AM 常与死细胞荧光探针如碘化丙啶（PI）等联合使用 ，同时进行活细胞和死细 胞的荧光双重染色。碘化丙啶（Propidium iodide ，PI）不能穿过活细胞的细胞膜 ，仅能穿过死细胞膜的 无序区域而到达细胞核，并嵌入细胞的 DNA 双螺旋从而产生红色荧光（Ex=535 nm, Em=617 nm）。Calcein 和 PI-DNA 都可被 490 nm 激发，因此可用荧光显微镜同时观察活细胞和死细胞。而用 545 nm 激发，仅可 观察到死细胞。
根据我司优化的实验体系 ，单次就 200 µL 细胞悬液进行染色 ，C331308E 和 C331308S 分别可以做 500 次和 1000 次检测。
产品规格
|
货号 |
C331308E/C331308S |
|
规格 |
500 T/1000 T |
组分信息
|
组分编号 |
组分名称 |
C331308E |
C331308S |
|
C331308-A |
Calcein-AM Solution（2 mM） |
50 μL |
50 μL×2 |
|
C331308-B |
PI Solution（1.5 mM） |
150 µL |
150 µL×2 |
|
C331308-C |
10×Assay Buffer |
50 mL |
100 mL |
储存条件
冰袋运输；其中 A 组分和 B 组分需-20℃避光干燥保存 ，C 组分-20℃保存 ，经常使用可放在 4℃保存。一 年有效。
注意事项
1. 由于 Calcein-AM 对湿度非常敏感，Calcein-AM 溶液每次取完需要量后，必须紧紧密封盖子。建议根
据单次用量 ，分装密封保存。Calcein-AM 工作液必须现配现用。
2. 碘化丙啶（PI）有一定的致癌性 ，操作时一定要注意防护。若接触到皮肤 ，需要立即用自来水清洗。
3. 为了您的安全和健康 ，请穿实验服并戴一次性手套操作。
4. 本产品仅用于科研。
使用说明
1. 工作液的配制
1.1 1×Assay Buffer（反应缓冲液） 的配制
从冰箱内取出 10×Assay Buffer ，根据单次用量于无菌条件取出适量 ，用去离子水（dH2O）做 10 倍稀释 以得到 1×Assay Buffer。
1.2 1×染色工作液的配制
1）先将低温保存的 Calcein-AM 溶液 (2 mM)和 PI 溶液（1.5 mM） 回到室温 20-30 min。 注意：第一次使用可对母液进行分装 ，以减少反复冻融次数。
2）取 5 µL Calcein-AM 溶液 (2 mM)和 15 µL PI 溶液（1.5 mM）加入 5 mL 1×Assay Buffer ，充分混匀。 此时得到 Calcein-AM 的工作液浓度为 2 μM ，PI 的工作液浓度为 4.5 μM。由于不同细胞系的最佳染色条 件不同，初次实验建议做梯度实验 ，以确定 Calcein-AM 和 PI 的最适浓度。梯度筛选的原则为使用最低的 探针浓度得到较好的荧光结果。加入 500 µL CFDA-SE 溶剂到 1 管 CFDA-SE 荧光探针中进行溶解，充分混 匀即得到 1000×的储存液。
【注意】该储存液最好在 1 个月内使用完毕，最长不超过 2 个月。剩余储存液请务必分装后于≤-20℃避光 干燥保存 ，避免反复冻融 ，-70℃避光保存可适当延长保存周期。
2. 染色步骤
1) 对于贴壁细胞 ，先用细胞刮刀或者胰酶-EDTA 消化细胞 ，之后离心收集细胞（1000 rpm ，3 min）。 对于悬浮细胞 ，直接离心（1000 rpm ，3 min）收集细胞。
2) 去上清 ，用 1×Assay Buffer 充分清洗细胞 2~3 次 ，以充分去除残留的酯酶活性。
3) 用 1×Assay Buffer 制备细胞悬液 ，使其密度为 1×105~1×106 细胞/mL。
4) 取 100 µL 染色工作液加入 200 µL 细胞悬液内 ，混匀 ，37℃孵育 15 min。注意：如果需要 ，可延长 孵育时间至 30 min。
5) 荧光显微镜下使用 490±10 nm 激发滤片同时检测活细胞（黄绿色荧光） 以及死细胞（红色荧光）。 另外 ，使用 545 nm 的发射滤片仅能观察到死细胞。也可以直接在荧光酶标仪下进行检测。
【注意】 可以使用以下方法来优化得到两种荧光染料的最佳工作浓度。
a）用 0.1%皂素或者 0.1-0.5%地高xin孵育细胞 10 min ，或者用 70%乙醇孵育细胞 30 min ，制备死细胞。
b）用 0.1-10 µM 的 PI 溶液进行死细胞染色，以得到仅对细胞核染色而不会对细胞质染色的最佳工作浓度。
c）用 0.1-10 µM 的 Calcein-AM 进行死细胞染色 ，以得到不会对细胞质染色的最佳工作浓度。然后用此浓 度进行活细胞染色 ，去观察是否活细胞能被染色。
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文献和实验brightpearl：我欲观察多种药物对神经细胞凋亡的影响，工作量较大，现市售细胞凋亡试剂盒TUNEL用于培养皿。有没有可用于96孔培养板的细胞凋亡试剂盒？ XTYang：bdbiosciences下属clontech子公司有的 个人做调亡的体会 ljksbs 如果是做细胞调亡的形态学观察，姬姆萨染色比较好；现在检测调亡比较流行的是Annexin-V FITC/PI双染，将细胞分为正常细胞，早期调亡细胞，晚期调亡细胞或继发性坏死细胞，机械性损伤细胞四个区域，比较敏感，不错。 DNA Ladder 法检测
-X100*0.9%NaCL配的,浓度都是1mg/ml. andywang：我用来做流式的PI配制方法是: 5mg PI +0.1ml Triton X-100 +3.7mg EDTA +10ml PBS,4度避光保存。为储存液，用时稀释10倍。 PI染液配方，用于DNA倍体检测 hawaii_flyer：请大侠给个PI染液配方，用于DNA倍体检测 cells：一般好象有两个浓度。可购自PHARMAGIN或SIGMA。 1、 比如用流式细胞仪测定神经细胞凋亡取缺氧-复氧培养各组海马神经元, 用2.5 g/L
干细胞植活最低数量要求是 2-5 x 106/ 公斤体重。然而正常人外周血中干细胞数量只占所有有核细胞的 0.1% 。很明显这些数量的干细胞是不足够运用于移植的，除非使用恰当技术增加外周血干细胞的含量供采集。此技术可通过给予供者集落刺激因子（通常是粒或粒 - 单集落刺激因子），同时可联合骨髓抑制剂（如环磷酰胺）的方法动员造血干细胞进入循环外周血中。联合使用化疗药物与集落刺激因子造成短暂的循环血中髓系细胞抑制，随后使骨髓代偿性地释放髓祖细胞、造血干细胞至外周血，从而达到动员干细胞的目的。联合使用细胞
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