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- 中国
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- 2025年07月13日
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- 详细信息
- 文献和实验
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99
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爱必信（上海）生物科技有限公司
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200T
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文献和实验Q：Annexin V 凋亡检测试剂盒的原理是什么？ A：Annexin V 是一种钙离子依赖性磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸 PS 有高度亲和力，可通过细胞外侧暴露的 PS 与凋亡早期细胞胞膜结合，将 Annexin V 标记荧光染料如 FITC 利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡。 碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)或 7-AAD 可与双链 DNA 特异性结合，并产生强烈的荧光，正常情况下无法透过细胞膜。由于凋亡晚期或坏死细胞膜丧失完整性，核染料 PI 或 7-AAD
【求助】Annexin V-FITC/PI细胞凋亡试剂盒的使用
，冰盒中保存，距离染色有2小时之久）。 不知道这种情况是否还有其它原因？想请教下这种情况有没有什么好的处理方法？比如说能否将细胞先按照试剂盒说明染色完成后进行固定？如果先固定的话有什么方法不会破坏细胞膜的通透性吗？否则先固定再染色布都是死细胞了吗，PI都呈阳性了，这个该怎么处理呢？ 另外，染色后是否需要离心去除细胞悬液中的背景荧光呢？有人建议离心，可是说明书上又没有提到离心操作？ 期待懂行的朋友的回复！不胜感激！ 叶绿素201006
膜的改变是这些特征中较早出现的一种。在凋亡细胞中，细胞膜磷脂酰丝氨酸（PS）从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的外侧。Annexin-V是一种35－36 KD的钙粒子依赖的磷脂结合蛋白，它对PS具有较高的亲和力。细胞凋亡时，可以和外翻的PS结合，从而可以检测凋亡的细胞。发生坏死的细胞其细胞膜上的PS也外翻，因而也会阳性。因此，常用的凋亡试剂盒除了采用Annexin-V标记之外，还会加一种DNA染料，常用的有PI和7－AAD，由于坏死的细胞膜通透性增高，染料可以进入细胞内和DNA结合，从而可以发荧光，区分出坏死细胞
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