柱层析硅胶（200-300目）

（交流）【分享】柱层析

的，一洗基本就没 了，必要时进行重结晶。 实验室常用的正向柱分离有加压、常压和减压等，我原是做天然产物全合成的，也做过少量天然产物分离工作。还常用到反向柱。 正向柱分离 1.TLC 1)加压、常压柱 主点Rf 0.5左右，相近的组份要能分开。 2)减压柱 主点Rf 0.1左右，相近的组份要能分开，或次组份在原点。 2.硅胶或氧化铝等 1)加压、常压柱 60到200目 2)减压柱 300目以上 大空树脂挺好，但自己用得少。硅藻土很多时侯也很好。 3.柱径 好分、量大

【建议】关于如何提蛋白质纯化问题（附例）

条带说明，从左到右，或1234567..... 2、建议把流程中的各个部分所用缓冲液说明一下，例如： 破菌缓冲液:如pH8.0，20mMTris，0.5N NaCl 破菌方法：如超声，4s工作，4s间隙，冰水浴，共200次 包涵体洗涤液：如PBS（pH7.4，20mM PB，0.15N NaCl） 包涵体溶解液：如pH8.0，20mMTris，0.5N NaCl，8M尿素 柱平衡液：如pH8.0，20mMTris，0.5N NaCl，8M尿素，20mM 咪唑 柱淋洗液：如pH

蛋白纯化反相柱的选择

对，要看杂蛋白的情况。如果分子量不是太大，那可以试试看再说，最好有保护柱。 Source柱的非极性和C8相近，一般也足以使蛋白保留了。可以放心的试，不用担心蛋白沉淀对柱的寿命产生影响。 常见的C8,c18都是硅胶基质的反相填料。这种填料比较耐压，但是pH范围较窄，一般为2~7，以免硅胶水解或配基脱落。 处理的话看说明书即可，要注意极性和非极性溶液之间的过渡就可以了，一般分析柱不要反冲。 如果是普通的层析硅胶，那还是属于正相层析，因为硅胶本身是极性的，一般不用于分离蛋白。同样