FITC标记荆豆凝集素I

荧光素FITC标记抗体的方法

当FITC在碱性溶液中与抗体蛋白反应时，主要是蛋白质上赖氨酸的r氨基与荧光素的硫碳胺键(thiocarbmide)结合，形成FITC-蛋白质结合物，即荧光抗体或荧光结合物。一个IgG分子中有86个赖氨酸残基，一般最多能结合15～20个，一个IgG分子可结合2～8个分子的FITC，其反应式如下FITC-N=C=S + N-H2-蛋白质 → FITC-NS-C-N-H2-蛋白质常用Marsshall(1958)法标记荧光抗体，也可以根据条件采用Chadwick等标记法或Clark

FITC标记凝集素的组织化学染色程序

FITC 标记凝集素的组织化学染色程序1．组织切片经脱蜡处理，若是Bouin液固定的组织，用70％乙醇洗3次除去组织切片内的黄色后，再用蒸馏水漂洗；2．PBS漂洗(含1％牛血清白蛋白)2次，每次5分钟；3．加入FITC-凝集素(PBS适当稀释)，置湿盒内孵育，室温1小时；4．PBS漂洗3次，每次5分钟；5．水溶性封片剂封片，荧光显微镜观察。6．结果 FITC标记的凝集素能直接与组织细胞内的糖基结合，从而显示糖基的位置，可用于检测组织细胞中的糖成分，阳性部位呈黄绿色荧光。7．注意

FITC标记抗体-改良法

ml三蒸水中即成；       方法与步骤：       根据Marshall氏法高效价的抗人球蛋白兔免疫血清，分离球蛋白。       1. 用0.15 mol/L NaCl的盐水及0.15 mol/L pH9.0的NaHCO3-Na2CO3缓冲液稀释使每毫升内含抗体10mg，缓冲液为总量的10%；       2. 将以上溶液降温至4℃，按蛋白：荧光素=50—80mg：1mg的比例加入异硫氰酸荧光素，在0—4℃下电磁搅拌12—14h；       3.用半饱和硫酸铵将标记球蛋白