2-((9R,10S,11R,15S)-12,14-Diox

类器官培养与应用——肺类器官

管中，吸去所有培养基。 14A、向离心管中添加 200μl 新鲜的 Matrigel，混合均匀后在 24 孔板的每个培养孔中心接种 50μl 混合液，目的是在每个孔内植入 1-3 个类器官。待 Matrigel 在 37℃ 培养箱中静置 10min 凝固后，加入 0.5ml hLOs 培养基进行培养。 15A、每 2-3 周重复步骤 12A-14A 。一旦前肠球体被置于 Matrigel 中，大约需要 50 天可以形成具有基底细胞、粘液分泌细胞、纤毛细胞，以及肺间充质细胞类型和原始肺泡细胞类型包围

基因组步行法扩增3’及5’侧翼序列

物。 (8)转移上层水相至另一新1.5ml 离心管中，弃下层有机物。 (9)加入2 倍体积 (190 μl)冰冷的95%乙醇。 (10)加人1/10 体积 (9.5 μl)3M NaAc (pH4.5)。 (11)低速旋涡5-10s (轻弹)。 (12)14000rpm，离心10min。 (13)倒掉上清，空气干燥沉淀。 (14)加入20 μl TE (10/0.1 pH7.5)溶解沉淀 (15)低速旋涡5-10s (轻弹)。 (16)1 μl纯化产物于0.8%凝胶进行电泳

类器官培养与应用——血管类器官

完全培养基清洗细胞一次。 14、计算聚集体的数量，将聚集体用 Collagen I 溶液重悬并置于冰上，调整聚集体的密度为 40-60 个细胞团/50μl。 15、从培养箱中取出含有第一层胶原的 12 孔板，并小心地向 12 孔板的每个孔中添加 0.5 mL含细胞聚集体的 Collagen I溶液。前后晃动平板，使细胞均匀地分布在孔内。 16、将 12 孔板放置在 37℃ 条件下固化 2h。 17、加入预热的 3ml 血管分化培养基，放置在 37℃，5％CO2 培养箱中进行培养。血管芽会在培养