标准蛋白质溶液(BSA,1mg/ml)，RC62138-1m

胶体金标记物的制备

沉淀：长期低温保存的蛋白质或4℃较长时间保存的抗体，特别是在浓度高于2mg/ml的情况下，很容易形成聚合物，聚合物对标记过程及免疫金探针的稳定性有一定影响，因此，标记之前须离心以除去这些聚合物。一般以100000r/min 4℃离心60min取上清液，调整蛋白质浓度至1mg./ml即可用于标记。二、胶体金pH值的调整胶体金与蛋白质的结合成功与否，取决于pH值，一般只有在蛋白质等电点（PI）略偏碱的条件下二者才能牢固地结合，因此，标记之前须将胶体金溶液的pH值调至待标记蛋白质的等电点略偏碱。需要提高

蛋白质定量分析

Maxisorb 442404）Micro test tubes, 大头针或喷火枪药品试剂：（a） Buffer A-0（b） BSA标准品 （Bio-Rad, bovine serum albumin, 100 μg/mL）（c） 未知浓度样本 （unknown BSA, 0.8 mL, 由教师调配发给）（d） Dye Reagent （Bio-Rad 500-0006） 先以水稀释四倍备用。 以染料Coomassie brilliant blue G-250 配制的溶液，勿与胶体电泳染色用的CBR-250

【专题讨论】新手做WB的几张片子，请各位高人指点。

常用的微量蛋白质快速测定方法。 考马斯亮蓝G-250染液的配制：称取100mg考马斯亮蓝G-250，溶于50mL 90％乙醇中，加入85％（W／V）的磷酸100mL，最后用蒸馏水定容到1000mL。此溶液在常温下可放置一个月。 采用Bradfold法进行蛋白定量，以1 mg/mlBSA 制作标准曲线。 首先，配1mg/ml BSA(1mg BSA溶于1ml三蒸水)，按下表配置梯度浓度的标准溶液。 浓度