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- 华尔纳生物
- WN-22167
- 武汉
- 2025年07月11日
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武汉华尔纳生物科技有限公司
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BaF3
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细胞代次低，活性高，品质保证，提供全程7*24小时专业技术指导售后服务 （养不活无理由全额退款）
类别 | 稳转细胞系 |
培养体系 | 专用培养基 |
冻存条件 | 60%基础培养基+30%FBS+10%DMSO，液氮储存 |
传代周期 | 1:3-1:6，每2-3天换液一次 48-72h |
细胞描述 | 转导方法：蛋白电转 克隆类型：纯合子 细胞鉴定：PCR，测序 修饰类型：敲除 细胞冻存或复苏发货 质量检测：细菌、真菌、支原体检测均为阴性 本库的细胞仅用于科研工作，未经许可不得用于其他目的，使用者不得将本库细胞转让给第三者。 |
细胞备注 | 收到细胞后请务必仔细阅读资料，了解细胞相关信息，如贴壁特性 (贴壁/悬浮/半贴壁半悬浮)、细胞形态、培养体系、传代比例和换液频率等。 |
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文献和实验就比较困难，某种程度上干扰更为重要，想说明一个基因对于一个事件是必须的，只有把它拿掉，事件终止（或程度减弱），才比较有说服力。但是，如果你的基因在细胞中基础表达本身就不高的话，还是有必要来选择过表达实验来对其表型进行验证的，否则实验会受到质疑。关于下调基因表达，一般来说干扰稳转株能满足实验所需。但是，干扰稳转株不能控制 shRNA 插入染色体的位置，染色体上的 shRNA 有时会丢失，另外 shRNA 也有脱靶效应，可能干扰了其他未知基因。还有就是，shRNA 是与目的基因的 mRNA 作用而使
想长期研究某个基因"少一点"之后细胞会怎样，第一步就是构建敲低稳转株： 基因敲低（KD）稳定细胞株到底怎么构建？和过表达流程一样吗？验证标准是什么？ 先说结论： 主流方案是 shRNA 慢病毒感染 + 抗生素筛选：把 shRNA 克隆到带抗性基因的慢病毒载体，感染目的细胞后用 puromycin 筛选，qPCR（必要时加 WB）确认敲低效率，就得到敲低稳转株。与过表达流程框架相同，但多了一个关键环节——靶点有效性验证。 方案确认顺序： 靶点设计 → 靶点有效性 → 感染条件 → 药筛浓度
想长期表达某个基因，但它一高表达细胞就死、一过表达表型全是"中毒"——这时候很多老师会想到诱导表达系统： Tet 诱导稳定细胞株（Tet-On）怎么构建？和普通稳转株差在哪？诱导倍数怎么验证？ 先说结论： Tet 诱导稳转株的核心是把"表达开关"装进稳转系统：细胞先稳定表达调控蛋白（Tet-On 的 rtTA），再引入由 TRE 应答元件控制的目的基因。平时不表达或低表达，加入诱导剂（多西环素 doxycycline）后才按剂量诱导表达。构建框架仍是"感染 → 筛选 → 验证 → 冻存
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