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- 华尔纳生物
- WN-53102
- 武汉
- 2025年07月16日
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武汉华尔纳生物科技有限公司
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293T
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细胞代次低，活性高，品质保证，提供全程7*24小时专业技术指导售后服务 （养不活无理由全额退款）
类别 | 稳转细胞系 |
培养体系 | 专用培养基 |
冻存条件 | 60%基础培养基+30%FBS+10%DMSO，液氮储存 |
传代周期 | 1:3-1:6，每2-3天换液一次 48-72h |
细胞描述 | 转导方法：蛋白电转 克隆类型：纯合子 细胞鉴定：PCR，测序 修饰类型：敲除 细胞冻存或复苏发货 质量检测：细菌、真菌、支原体检测均为阴性 本库的细胞仅用于科研工作，未经许可不得用于其他目的，使用者不得将本库细胞转让给第三者。 |
细胞备注 | 收到细胞后请务必仔细阅读资料，了解细胞相关信息，如贴壁特性 (贴壁/悬浮/半贴壁半悬浮)、细胞形态、培养体系、传代比例和换液频率等。 |
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文献和实验就比较困难，某种程度上干扰更为重要，想说明一个基因对于一个事件是必须的，只有把它拿掉，事件终止（或程度减弱），才比较有说服力。但是，如果你的基因在细胞中基础表达本身就不高的话，还是有必要来选择过表达实验来对其表型进行验证的，否则实验会受到质疑。关于下调基因表达，一般来说干扰稳转株能满足实验所需。但是，干扰稳转株不能控制 shRNA 插入染色体的位置，染色体上的 shRNA 有时会丢失，另外 shRNA 也有脱靶效应，可能干扰了其他未知基因。还有就是，shRNA 是与目的基因的 mRNA 作用而使
： 不需要包装病毒，起始简单； 依赖细胞的转染效率，仅适合 293T、HeLa 等易转染细胞； 瞬时表达质粒也会短暂抗药，筛选背景大、周期长、克隆差异大； 目前已较少作为构建稳转株的优先方案，多见于一些经典细胞系建立的历史方案。 --- 五、四种方法怎么选？ 慢病毒 转座子 CRISPR KI 质粒筛选 难转染细胞 ✅ 优先考虑 ❌ 较难 ⚠️ 可做但效率低 ❌ 不适合 定点整合 ❌ 随机 ❌ 半随机 ✅ 精确 ❌ 随机 过表达/敲低 ✅ 最常用 ✅ 可用 ⚠️ 非其定位
研究基因功能，最常见的起点就是过表达（Overexpression, OE）： 想在目的细胞里长期稳定地高表达某个基因，过表达稳定细胞株应该怎么一步步构建？ 先说结论： 主流方案是"慢病毒感染 + 抗生素筛选"：把目的基因克隆到带抗性基因的慢病毒载体，包装病毒后感染目的细胞，用 puromycin 等抗生素筛掉未整合的细胞，qPCR/WB 验证后扩增冻存，就得到过表达稳转株。 构建前建议按这个顺序确认方案： 载体元件 → 病毒滴度 → MOI → 抗生素浓度 → 筛选形式（混合
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