小鼠脾脏CD4+T细胞分离试剂盒（阴选）

小鼠脾脏CD4+ T细胞分离试剂盒产品描述

Cat NO: IMP-MK016

脾脏是机体重要的淋巴器官，内含 B 细胞、T 细胞等多种重要的免疫细胞，其中 CD4+ T 细胞含量 约占 20-25%，小鼠脾脏 CD4+ T 细胞分离试剂盒可通过阴性分选法从小鼠脾脏中分离纯化出 CD4+ T 细 胞，纯化后可用于进一步进行培养扩增或者直接进行 RT-qPCR 、Western blot 、流式细胞术等各种免疫 学实验。

小鼠脾脏CD4+ T细胞分离试剂盒适用范围

本试剂盒适用于分离小鼠脾脏中的 CD4+ T 细胞。

小鼠脾脏CD4+ T细胞分离试剂盒规格

本试剂盒规格为 10/25/50 次(以 1*10^7 单细胞悬液为 1 次计)

小鼠脾脏CD4+ T细胞分离试剂盒分离指标

本试剂盒中的 Biotin-Antibody Mix 中包含多种抗小鼠的生物素抗体，因此可以结合多种非目标细 胞实现 CD4+ T 细胞的分离纯化。

小鼠脾脏CD4+ T细胞分离试剂盒运输和存储条件

2-8 ℃保存与运输，所有组分开封后，有效期为 6 个月。

小鼠脾脏CD4+ T细胞分离试剂盒组成信息

表 1. 试剂盒组成信息

产品货号	产品名称	产品规格	储存条件
IMP-MK016LA	Biotin-Antibody Mix	100 μL	2-8°C 6 个月
IMP-MK016MA		50 μL	2-8°C 6 个月
IMP-MK016SA		20 μL	2-8°C 6 个月
IMP-MK016LB	CD4+ T 细胞分选磁珠	1000 μL	2-8°C 6 个月
IMP-MK016MB		500 μL	2-8°C 6 个月
IMP-MK016SB		200 μL	2-8°C 6 个月

分离步骤

1.取新鲜小鼠脾脏一只，在 70 μm 细胞筛网上研磨脾脏，以预冷的 PBS 冲洗细胞筛网，收集细 胞悬液于 50 mL 离心管中，500 g ，离心 5 min(一个小鼠脾脏可取得 3-5×107 个脾脏细胞)。

2.离心结束，弃上清，加入 5 mL 红细胞裂解液，室温裂解 5 min ，再加入 20 mL PBS ，500 g ，离 心 5 min。

3.离心完成后，弃上清，将脾脏细胞重悬于 PBS ，细胞悬液用 70 μm 细胞筛网过滤后，计数。计 数完成后，将脾脏细胞悬液 500 g ，离心 5 min。

4.将细胞重悬于分选 buffer 中，调整细胞密度为 1×108 cells/mL(分选 buffer 为含有 2 mM EDTA 和 2% 胎牛血清(FBS)的 PBS 或者含有 2 mM EDTA 和 0.5% BSA 的 PBS，使用前需预先通过 0.22 μm 滤膜过滤除菌)，调整细胞密度为 1×108 cells/mL。

5.取 100 uL 细胞悬液加入 2 μl Biotin-Antibody Mix 混合均匀，4°C 孵育 15 min ，期间每隔 5 min 轻弹管壁使细胞与抗体混合均匀。

6.孵育完成后加入 1 mLCD4+ T 细胞分选 Buffer 重悬，500 g ，离心 5 min ，弃去上清，加入 100 μL 的 CD4+ T 细胞分选 Buffer 重悬。

7. 吸取 20 μl CD4+ T 细胞分选磁珠(吸取前涡旋振荡重悬磁珠，确保磁珠完全重悬，加入 1mL CD4+ T 细胞分选 Buffer 进行重悬清洗磁珠，1000 g 离心 5 min ，弃去上清，加入 10 μL 的 CD4+ T 细胞分选 Buffer 重悬)。

8.加入 20 μl CD4+ T 细胞分选磁珠，混匀后 4 °C 孵育 10 min ，期间每隔 5 min 轻弹管壁使细胞和 磁珠混合均匀(此试剂盒说明书为分选 1×107 个脾脏细胞中的 CD4+ T 细胞的使用说明，如果分选更 多的细胞，则可按比例增加 Biotin-Antibody Mix 、CD4+ T 细胞分选磁珠的用量，少于 1×107 个细胞则 将细胞悬液体积补至 100 μl ，加入 2 μl Biotin-Antibody Mix 和 10 μl CD4+ T 细胞分选磁珠)。

9.孵育完成后，加入 2.5 ml 的 CD4+ T 细胞分选 Buffer 重悬，用移液器上下混合吹打 5 次混匀(避 免剧烈振荡或者上下颠倒混匀)，移入一个无菌流式管中。

10.将含有细胞的流式管置于磁力架上，静置 5 min ，待磁珠被吸附，细胞悬液变为清澈后将细胞 悬液吸入一个无菌离心管中(期间流式管在磁力架中)，此细胞悬液中即包含纯化的小鼠脾脏 CD4+ T 细胞，500 g ，离心 5 min ，弃去上清，收集细胞。

注意事项

1.磁珠和抗体混合液使用和保存过程中均应避免冷冻、高速离心等操作。

2.操作过程应在无菌环境下进行，必须保证操作过程中使用的所有容器及所有直接接触细胞液的器 具严格无菌。

3.本产品需要与磁力架配套使用。

4.本产品仅供科研使用。