hPSC诱导肝类器官成熟培养基

hPSC 诱导肝类器官成熟培养基产品描述

Cat NO : IMV-A015

本产品为 hPSC 诱导肝类器官成熟培养基，可以维持 hPSC 诱导分化肝类器官试剂盒 (IMV-H001)诱导分化获得的肝类器官的长期生长、传代扩增。

实验仪器、材料

仪器：生物安全柜、细胞培养箱、水平式离心机、倒置显微镜、低温冰箱

材料：细胞培养板(规格为：6 孔、12 孔、24 孔)、离心管(规格为 15 mL 和 50 mL)、移 液器(规格为 10 μL 、100 μL 、1000 μL)、无菌吸头(规格为 10 μL 、200 μL 和 1000 μL)、移液管(规格为 10mL、50mL)

hPSC 诱导肝类器官成熟培养基产品规格

产品货号	产品名称	产品规格	储存
IMV-A015S	hPSC 诱导肝类器官成熟培养基	125 mL	-20 ℃ , 12 个月
IMV-A015L		500 mL

实验内容与方法

肝类器官换液

吸去孔中培养基，每孔加入 700μL 恢复到室温的肝类器官成熟培养基进行长期培养，每隔一 天更换培养基，7-10 天传代。

肝类器官传代

(1)取出冷冻的基质胶置于 4℃解冻，并提前将枪头放置在-20℃预冷 1h;

(2)吸除培养基，加入 1mL 预冷的 PBS 溶解基质胶，将混合液转移到 1.5mL EP 管中，300g 离心 5min，去除上层的 PBS 和基质胶;

(3)加入 1mL Tryple express ，吹打 5-8 次，使类器官与 Tryple express 充分接触，接着转移到 培养箱中，静置解离 5min;

(4)5min 后取出 EP 管，300g 离心 5min ，去除上清，再加入 1ml DMEM/F 12 ，吹打孔中混合 物 40-50 次，使类器官团彻底解离成单细胞，离心，去上清;

(6)用预冷枪头按每孔 30μL 的量在离心管中加入适量的基质胶，吹打5-8 次，均匀混合单细 胞-基质胶，注意吹打过程中避免产生气泡;

(7)将提前放在培养箱中的 24 孔板取出，在孔中心位置加入 30μL 胶滴，缓慢打入混合液时， 逐渐向上移动枪头，使细胞均匀分布在胶中;

(8)将培养板放在培养箱中，20-30min ，使胶滴凝固;

(9)小心沿孔壁加入 700μL 恢复室温的肝类器官成熟培养基，注意不要碰到胶滴;

(10)将孔板放到培养箱中，继续培养，每隔 1 天换液一次(可周一、周三、周五换液，周五 可添加至 800μL ，周六、周日不换液)，1 周左右传代一次。

(11)肝类器官成熟后可进行染色鉴定或肝祖细胞/肝干细胞检测。