野百合碱诱导的肺动脉高压模型服务

一、实验动物选择

1. 种属与品系：
   • 首动物：雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠（6-8周龄，体重200-250 g），因其对MCT敏感性高且模型稳定性强。
   • 其他选择：部分研究使用小鼠或豚鼠，但大鼠模型更易成功且病理特征更接近人类。
2. 饲养条件：SPF级环境，适应性饲养1周以排除应激干扰。

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二、模型构建步骤

1. MCT溶液配制

• MCT来源：Sigma公司生产，纯度≥98%。
• 溶剂与浓度：
  • 常用溶剂：生理盐水或乙醇-生理盐水混合液（乙醇:生理盐水=2:8）。
  • 配制浓度：1%-2%（即50-60 mg/kg剂量对应注射体积0.5-1 mL/100 g体重）。

2. 给药方式与剂量

• 给药途径：
  • 腹腔注射（IP） ：最常用，操作简便且吸收稳定。
  • 皮下注射（SC） ：部分研究采用，需注意注射部位（如背部）无菌操作。
• 剂量：60 mg/kg单次给药，此剂量可平衡模型成功率与动物死亡率。
• 对照组处理：注射等体积生理盐水或溶剂对照。

3. 模型形成周期

• 关键时间节点：
  • 急性期（1-2周） ：肺血管内皮损伤、炎症反应启动。
  • 慢性期（3-4周） ：肺血管重塑、肺动脉压力显著升高，右心室肥厚形成。
• 监测周期：通常于给药后第1、2、3、4周分别检测血流动力学及病理指标。

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三、模型成功标志

1. 临床表现：
   • 活动减少、毛发枯糙、呼吸困难、体重下降。
   • 严重者出现胸腹水、肝脏淤血及右心衰竭。
2. 血流动力学指标：
   • 平均肺动脉压（mPAP） ：模型组显著高于对照组（如48.2±3.33 mmHg vs. 17.2±1.26 mmHg）。
   • 右心室收缩压（RVSP） ：显著升高（如60-80 mmHg）。
3. 右心室肥厚指数（RVHI）：
   • 计算方式：RV/(LV+S)值（右心室质量与左心室+室间隔质量比值）。
   • 模型组典型值：0.94±0.02（对照组0.28±0.01）。

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四、检测指标与评估方法

1. 生理与功能评估

• 超声心动图：测量主肺动脉直径、右心室射血分数（RVEF）及右心室容积变化。
• 右心导管术：直接测定肺动脉压力及右心室功能参数（RVESP、RVEDP等）。

2. 组织病理学分析

• 肺血管形态学：
  • HE染色：观察肺小动脉中膜增厚、管腔狭窄及肌化程度。
  • 免疫荧光/免疫组化：检测α-SMA（平滑肌标志物）、CD31（内皮标志物）表达。
• 右心室肥厚：心脏分离称重计算RVHI。

3. 分子机制研究

• 炎症因子：ELISA检测血浆IL-1β、IL-6、TNF-α水平升高。
• 信号通路：Western blot分析PI3K/Akt-eNOS、Rho/ROCK、BMPR2等通路蛋白表达。
• 细胞增殖与凋亡：EdU/BrdU标记增殖细胞，TUNEL检测凋亡。

4. 其他指标

• 肺血管密度：单位面积肺小动脉数量（个/mm²）。
• 血管中膜厚度：CMIAS图像分析系统定量计算。

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五、注意事项与模型优化

1. 种属差异：
   • 小鼠对MCT敏感性较低，需联合低氧处理或基因修饰增强模型效果。
2. 剂量控制：
   • 超过60 mg/kg可能因急性肝毒性导致高死亡率。
3. 模型稳定性：
   • 联合低氧（10% O₂）或Sugen5416（VEGFR抑制剂）可模拟更复杂的血管重构。
4. 伦理与动物福利：
   • 监测动物状态，及时处理严重呼吸衰竭个体。

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六、应用场景

1. 药物筛选：如法舒地尔（ROCK抑制剂）和丹参酮IIA通过该模型验证疗效。
2. 机制研究：探究TWIST1、DSP等基因在肺血管重塑中的作用。
3. 临床转化：模拟人类PAH病理特征，为靶向治疗提供依据。