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美国GENMED品牌产品由国际优秀留美博士团队创建的生物医药科技企业。公司总部位于美国生物医药之谷波士顿地区。公司创办人在美国深造、研究、工作和创业十三余年,曾任美国哥伦比亚大学肿瘤遗传研究院的研究员,负责主持美国卫生部、农业部和能源部的多项重大科技项目。
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文献和实验(细菌内同源重组AdEasy System)一、目的基因的克隆(以pshuttle-CMV质粒为例)步骤1、选择适当酶切位点,进行酶切连接,将目的片段插入pshuttl-CMV质粒多克隆位点。2、重组质粒鉴定: 酶切鉴定或测序。3、重组质粒扩增,纯化并准备适量含目的基因的穿梭质粒。4、用PmeI单酶切线性化重组穿梭质粒,电泳鉴定质粒完全被切开。5、胶回收线性化质粒,以备共转化使用。二、共转化 1、大肠杆菌BJ5183电转感受态制备 (1)从新鲜琼脂板上挑取单个BJ5183细菌,接种于LB
用PmeI单酶切线性化重组穿梭质粒,电泳鉴定质粒完全被切开。 5. 胶回收线性化质粒,以备共转化使用。 二 共转化 1 大肠杆菌BJ5183电转感受态制备 ² 从新鲜琼脂板上挑取单个BJ5183细菌,接种于LB培养基中,37℃振摇过夜。 ² 接种25ml过夜培养物于500ml LB培养基,37℃振摇,至OD600 达到0.4。 ² 迅速将培养物置于冰浴中30min,至充分冷却。 ²
Construction and Characterization of Adenovirus Vectors
2006 ). Suspend the DNA in a total volume of 25 µL of 0.1X TE-Ad. 12. Repeat Steps 5-10 with 5 µL of DNA (from Step 11) and 100 µL of DH5 cells, rather than BJ5183. 13. Select two colonies from each plate. Purify the DNA
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