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文献和实验用293FT细胞系和相关的ViraPower™ 试剂制备的高滴度的慢病毒储备液,进行有效的和可控制的导入。一旦制备好了慢病毒储备液,就可以转染细胞以观测RNAi反应(图9)。pLenti6/BLOCK-iT™-DEST 慢病毒 RNAi 载体( pLenti6/BLOCK-iT™-DEST Lentiviral RNAi vector)提供能够长期观察稳定RNAi效应的能力。这个载体包含包装U6RNAi框到病毒所需的全部的元件,因而你能够转染shRNA到正在分裂、难于转染和不分裂的细胞中(图10
Blastocyst embryo transfer into pseudopregnant recipient female mouse(图)
and exhibit bad planes of anesthesia when heavy. This is also a very inexpensive mouse to use. As an alternate, another strain I have used with considerable success is B6D2F1. These mice are hardy and display hybrid vigor. The Equipment For surgery
polIII型启动子和终止子序列,RNAi靶序列克隆进入后将在哺乳动物细胞中形成shRNA。目的载体(destinationvector)Gateway®适合的目的载体(DEST)包含attR位点,可以与入门克隆进行重组,构建表达载体。BLOCK-iT™RNAi慢病毒和腺病毒DEST载体接受来自U6入门载体的RNAi框。此外,也有在原核、酵母、昆虫或者哺乳动物系统表达天然蛋白或者融合蛋白的DEST载体可供选择。LRClonase™便于attL和attR位点在LxRGateway®重组反应中进行重组的一种酶
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