pMAl-p2G载体

手把手教你做好体外 DNA 重组

克隆载体 pRCII 转入大肠杆菌为例。TA 克隆载体 pRCII 含有 LacZ 基因，多克隆酶切位点位于其间，当没有外源基因插入 LacZ 基因中时，LacZ 基因的启动子可使此基因编码半乳糖苷酶，从而催化底物 X-gal 发生化学反应，菌落变成蓝色；当外源基因与 pRCII 载体发生连接时，LacZ 基因失活，菌落呈白色；同时该质粒还含有氨苄青霉素耐药基因。根据此特性，白色菌落含有重组质粒。在用这种质粒进行克隆时，转化平板培养基中要加入 0.5 mM IPTG、50 g/mL 氨

RNAi技术专题之：体外转录合成双链RNA

突变和化学修饰的耐受性，认为siRNA的5’端相对于3’端具有对突变的较高耐受性。有学者认为正义链3’突出端的任何碱基修饰对siRNA作用效果均无明显影响。还有学者认为与反义链互补的正义链3’端发生1—4个碱基的错配反而有助于增强RNAI的活性。二、siRNA制备方法目前为止较为常用的5种制备siRNAs的方法包括化学合成体外转录长片断dsRNAs经RNase III 类降解 (e.g. Dicer, E. coli, RNase III)siRNA表达载体或者病毒载体在细胞中表达siRNAsPCR制备

四步致胜奇招 高效克隆你值得拥有（上篇）

”自我连接、目标片段正向/反向插入傻傻分不清，徒增后面的筛选烦恼。做实验，有时真需要一点运气。 好运气不常有，合适的酶切位点跟合适的爱情一样不那么容易碰到。载体和片段的酶切位点难得一致——有时你有我无，有时前后顺序相反，有时两边全都对不上。但是“拼接”双方的任务是必须完成滴，运气不够就要靠技术和经验：有没有同裂酶？有没有能产生同样粘端可互补的酶——举例说 BamH I(G/GATCC)、Bcl I(T/GATCA)、Bgl II(A/GATCT)、Dpn II(/GATC)、BstYI(R