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48T
1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2. 设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
人双肾上腺皮质激素(DCX)ELISA Kit
3. 样本孔先加待测样本10μL,再加样本稀释液40μL;空白孔不加。
4. 除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
人双肾上腺皮质激素(DCX)ELISA Kit5. 弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
6. 每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7. 每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。
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文献和实验缺点 1 放射性的东西可否不用 2 要加接头,还要磷酸化 clontech 的: 第二链的合成有PCR技术,是否会引起碱基突变 Novagen的: 优点 1 提供两种primer,oligo dT & random primer,可根据目的进行选择; 2 提供EcoRⅠ/HindⅢ酶切位点,便于定向克隆; 缺点 不知什么原因第二链合成效率不高
)9 ]在RNA 模板上没有特异性结合位点,所有RNA 都可以做为第一链cDNA合成的模板; (2) Oligo(dT)18 与poly(A)+ mRNA 的3’-末端互补,只有poly(A)+ mRNA 可作为cDNA合成的模板; (3) 采用序列特异性引物以其结合位点为起始位点。 2.当第一链cDNA合成条件与PCR的条件能够兼容时,则本试剂盒的第一链cDNA合成产物可直接加入PCR反应混合物中进行反应。 3.第一链cDNA合成产物同样可经过处理后作为第二链合成
-PCR技术的改进:改进之一是利用锁定引物((lock docking primer)合成第一链cDNA,即在oligo(dT)引物的3'端引入两个简并的核苷酸【5'-Oligo(dT)16_30MN-3', M=A/G/C;N=A/G/C/T】,使引物定位在poly(A)尾的起始点,从而消除了在合成第一条cDNA链时oligo(dT)与poly(A)尾的任何部位的结合所带来的影响;改进之二是在5‘端加尾时,采用poly(C),而不是poly(A);改进之三是采用RNase H一莫洛尼氏鼠白血.病毒
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