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- 2025年07月09日
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文献和实验superskyfly 我自己都觉得我自己很牛，千百人都做出来的试验，我就是做不出来。质粒用的是Promega p4.32-NF-kB-Luc, 转染用的是Invitrogen的Lipofactamin, 激活用的是Sigma生产的PMA和PHA-P,Assay用的是Promega dual,结果加了PMA和PHA的和不加的读数几乎没有区别。加了compound的和不加的也没有区别。 用过PC3, Jurkat, A549，HCT116都是一样。
双荧光素酶 启动子 转录因子 实验怎么设计？内参和分组一步别错
因子 NC 背景基线 2 空 luc + 转录因子过表达 排除转录因子非特异影响 3 靶基因 promoter-luc + NC 启动子本底活性 4 靶基因 promoter-luc + 转录因子 看是否有调控 5 promoter-mut-luc + NC 突变本底 6 promoter-mut-luc + 转录因子 确认结合位点 转染量参考：目的 firefly luc 质粒 0.5 μg、转录因子质粒 0.5 μg、Renilla luc 质粒 0.02 μg。合同录入
tianjiaoya 我想构建一个真核表达质粒，用这个真核表达质粒来表达绿色荧光蛋白，但是我想让绿色荧光蛋白的表达受酵母菌GLA4转录因子的调控，也就是说有GLA4存在，这个质粒就表达绿色荧光蛋白，没有GLA4存在，就不表达绿色荧光蛋白。当然需要对真核表达质粒上的启动子做相应的调整，但是我现在的问题是，转录因子GLA4能不能对质粒上有相应调控元件的表达盒，进行调控？据说GLA4上有核定位元件，要是将这个核定位序列删除，可行吗？据说核内有很多的辅助因子，参与了蛋白
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