NM4-64 神经元荧光探针

产品概述：
产品名称：NM4-64 神经元荧光探针
产品规格：1 mg
产品应用方向：神经荧光染料
产品保存条件：-20℃避光保存，有效期见外包装。
产品运输条件：冰袋
保质期（月）：60
外观：可溶于水的紫色固体
Ex/Em：543/- nm, (emission in MeOH is too weak to measure)
Ex/Em：510/750 nm (in membranes)
分子式：C29H45N4Cl3
分子量：555.5
分子结构图：


产品介绍：
神经末梢探针是一系列阳离子型苯乙烯基荧光染料，用于跟踪神经肌肉连接或突触的突触活动。这类染料通常具有亲脂性尾部（两个碳链）和带阳离子的高亲水性头部。神经末梢染料被命名为 NerveRed 或 NerveGreen 后接一个碳数，表示亲脂性尾巴的长度。NM 染料具有相似的结构，此外，它们在带正电的头部具有醛固定胺。 阳离子苯乙烯基染料是通过活性依赖性染色突触小泡来发挥功能。染料与细胞或组织共孵育时，染料的水相部分没有荧光，而染料的亲脂性尾部插入细胞膜并呈现强荧光。神经刺激后，在进行胞吞作用时，染料被包裹在囊泡内，因此，洗去细胞表面附着的染料后，荧光信号强弱表示新形成的囊泡的数量的多少。反之，在胞吐作用时，染料与神经递质一起从囊泡释放，导致荧光信号减少。因此，荧光强度的变化反映了胞吞/胞吐或突触活动的情况。内吞过程中荧光增加的速率——“结合速率”和胞吐过程中荧光减少的速率 ——“解离速率”因染料种类而异。通常，具有较长亲脂性尾部和更多双键的染料对膜具有较高的亲和力，因此具有较高的结合速率和较低的解离速率。 本产品等同于 AM4-64，NM4-64 染料能用于固定细胞染色。

使用方法：
以下是在盖玻片上对培养的神经元细胞的神经末梢染色，然后进行固定和免疫染色的方案。神经末梢染料也可用于标记非神经元细胞类型的内吞囊泡。染色可以在 4℃进行以选择性标记质膜; 在室温或 37℃ 下，染料的内吞通常在 10 min 内发生。可以使用台氏液液或其它缓冲液，可选择性添加钠离子通道阻断剂河豚-毒素（TTX），其目的是阻断动作电位并防止染色后的突触囊泡释放。用于特定实验的最佳方案需要由实验者摸索。
1. 在 50 mM 台氏液中稀释神经末梢染料至最终浓度为 4 μM。在室温下将含有细胞的盖玻片置于该溶液中 1 min，使细胞完全浸没。
2. 将盖玻片转移至台氏液 + 0.5 μM 河豚-毒素（TTX）溶液中，室温下孵育 1 min。
3. 室温下，用台氏液 + 0.5 μM TTX 溶液反复多次洗涤盖玻片。
4. 固定。将盖玻片用 4%多聚-甲醛，室温固定 20 min。
5. 将盖玻片直接转移至预冷的含 0.01%Triton X-100 的 PBS 中，4℃放置 10 min。
6. 预冷的 PBS 洗三次，每次 1 min。
7. 在含有一抗的 10%的血清/PBS 中，4℃染色 3 h。抗体浓度应该为常规免疫荧光染色的两倍。
8. 预冷的 PBS 洗三次，每次 1 min。
9. 在含有二抗的 2%的血清/PBS 中，4℃染色 40 min。抗体浓度与常规免疫荧光染色的相同即可。
10. 预冷的 PBS 洗三次，每次 1 min。
11. 荧光显微镜下拍照观察。