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- 文献和实验
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- 保存条件:
低温运输,按要求保存,6个月有效。
- 库存:
现货
- 供应商:
鹿森生物
- 规格:
50ml
注意事项:主要由去离子甲酰胺、SSC、SDS、变性鲑鱼精DNA、DEPC水等组成,使用前避免污染。
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文献和实验4~8h,再用流水冲洗,双蒸水洗2~3次。在160℃烤箱中烘烤2~4h。亦可经15磅高压灭菌20min处理,可将载玻片上的核酸酶消除。 2. 组织切片与预处理 (1)冰冻切片:新鲜组织也可在取材后,直接置入液氮中迅速骤冷,冷冻切片后,4%多聚甲醛固定5~10min,也可保存在-70℃中待用。杂交前切片迅速恢复至室温并干燥,0.1mol PBS洗三次,2×SSC洗10min,滴加预杂交液室温孵育1h。 (2)石蜡切片:组织固定后,常规石蜡包埋切片,可长期
将从待检标本提取的核酸(质粒或 染色体DNA)100℃ 10 min 煮沸变性,迅速置冰/氯化钠中冷却。 ②膜的处理:用2×SSC ,湿润均匀,37℃烘干后,即可点样 ③点样:取变性待检核酸1ul 点在硝酸纤维素膜(0.45um)上,同 时设阳性和阴性对照,室温干燥。 ④80℃真空干燥2h,将DNA固定于膜上。 2.预杂交及杂交 ①预杂交:将杂交膜放入装有适当体积预热的标准预杂交液的杂交 袋或杂交杯中 ,37℃预杂交 30分钟,轻轻搅拌使膜在该温度下孵育。
NaCl 20ml;1molMgCI 50ml;消毒超净水加至1000ml。 6. 去离子甲酰胺 将阴阳离子交换树脂各5g加入50ml甲酰胺中,待树脂下沉后用上清液。 7. 50%硫酸葡聚糖 5g硫酸葡聚糖加10ml DEPC水,不断搅动使之完全溶解。 8. 50×Denhardt's液 为1%Fico11type 400(聚蔗糖)0.2g;1%PVP(聚乙烯砒硌烷酮)0.2g;1%BSA(牛血清白蛋白)0.2g;DEPC水 20.0ml。 9. 预杂交液 为去离子甲酰胺5.0m
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