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92
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KAPA HyperExplore MAX 0.5Mb T4, 12 rxn
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上海博耀商贸有限公司
- 规格:
12
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文献和实验wangch84 各位高手,兄弟最近忙于质粒构建,意图将一段长约4000 bp的片段,通过BamH1和EcoR1两个酶切位点连接到pcDNA3.1+载体上。情况如下: 1. 通过LA Taq酶扩增,并纯化回收目的片段(引物中带有酶切位点,保护性碱基=3,上游带有Kozak序列);由于回收效率很高,所以在进行下一步双酶切时只加了12 μl的目的片段,H2O 20 μl,10 X K BUFFER 4 μl,两种酶各2 μl,37℃作用过夜(12-14 h
上,而是从分子生物学水平上研究生物大分子,特别是核酸结构及其组成部分。在此基础上建立的众多检测技术中,核酸探针(Nuclear acid probe)和聚合酶链反应(Polymerase chain reaction)以其敏感、特异、简便、快速的特点成为世人瞩目的生物技术革命的新产物,业已逐步应用于食源性病原菌的检测。 1. 核酸探针 将已知核苷酸序列DNA片段用同位素或其他方法标记,加入已变性的被检DNA样品中,在一定条件下即可与该样品中有同源序列的DNA区段形成杂交双链,从而达到鉴定样品中DNA
还是老板亲自动手演示了一遍,学到正宗的克隆技术,才得以成功。关于你的这个克隆,我的意见如下: 1)选用好一点的聚合酶,保证序列的保真性。我们一直使用一种叫做KAPA HIFI READYMIX的酶,很方便,扩增能力和保真度都超级好。普通的taq酶扩增长片段容易出错,反而浪费时间和试剂。 2) 如果直接酶切PCR产物,请确保你的上下游引物5'端已经引入合适的酶切位点和保护碱基(非常重要),我当时选用的是XhoI和HindIII这两个位点。 3)凡是用来做克隆的DNA产物,跑胶一定
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