pET-30c(+)质粒

【共享】PET重组质粒转化表达质粒中遇到的问题

晚上每天都有人做报告，我觉得让我收获最大的是Bill Studier的报告。本来这个报告是后来才听到的，但是由于Burgess的模块是唯一的涉及大肠杆菌中表达蛋白的，我把这一段提前来说说。Studier这老哥是Brookhaven National Laboratory的，一生研究T7噬菌体，也是T7 RNA polymerase induction system（pET系列质粒）的发明者。 T7系统在大肠杆菌表达蛋白的应用实在太广泛了，但凡表达蛋白的兄弟姐妹们的不可能不知道这个系统

DYCZ一28A、28B、28C、28D、29、30型夹芯式垂直电泳槽

一、组成部件（一）装有铂金丝的贮液槽一对，配有冷却装置及电泳缓冲液流出口。（二）凹型橡胶框，配有玻璃板，可分别制作厚度为lmm、1.5mm的凝胶板，操作时根据需要选择适当厚度的玻璃板及梳子配套使用。（三）样品孔模具（梳子）用于电泳加样。（四）固定贮液槽的螺丝杆及螺母4对，28D、30型为5对。（五）橡胶管五根。两根长的用于连接冷却水的出入口；中等长度的两根用于连接电极缓；中液的流出口；最短的一根用于连接贮液槽间的冷却水。（六）导线1付。二、使用方法（一）清洗部件上述部件组装前要彻底清洗干净

用于蛋白质表达和纯化的pET-32α（+）载体的构建

的BL-21 / pET32a（+）/ pTBO超声处理后的上清液; 泳道3：诱导BL-21 / pET 32a（+）/ pTBO超声处理后沉淀; 泳道4：BL-21 / pET 32a（+）/ pTBO超声处理诱导5小时后的上清液。pTBO融合蛋白的分子量约为22kDa。经验对于原核物种中的异源蛋白质表达，首先，我们需要优化通常用于大肠杆菌的密码子。其次，在培养基中加入IPTG后，让培养物生长不同的时间点，如3小时，6小时，12小时18小时，并在37°C，30°C，21°C或不同的温度下尝试不同