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- EK-Bioscience
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- 2025年10月29日
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2ug
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类似物的瞬时表达方式。miRNA的过表达载体中有插入成熟miRNA、pre-miRNA及pri-miRNA序列三种形式。其中pri-miRNA（含侧翼序列）的方式由于保留了每个microRNA独自的原始天然双臂结构，效果更好，是应用最为广泛的方法。microRNA过表达系统中有CMV启动子（II型启动子）和H1启动子（III型启动子）两种方式供选择。III型启动子（H1、U6等）具有表达效率高、有效的确定终止位置等优点，成为首选。II型启动子适用于pri-miRNA序列中有连续的5个T-导致III
shRNA表达质粒多采用RNA聚合酶III启动子，如人源H1或鼠源U6启动子，pol III在哺乳动物细胞（绵羊是哺乳动物）内引导非编码小RNA的转录，转录产物无poly(A)尾，且在转录过程中遇到连续4-5个U时转录终止。此载体最后转录出的产物是经折叠形成的发夹状小RNA(shRNA)； shRNA 在细胞内被Dicer酶切割成3’端带有两个U突出的siRNA，进而启动RNAi，介导基因沉默。载体中的间隔序列为9个核苷酸时最为有效。 是可行的！ 高成胡君
基因，可通过 IRES 将两个目的基因相连； （ 3 ）携带干涉序列 shRNA 的穿梭质粒：首先将 H1 启动子构建到 pShuttle 质粒上，然后将目的基因克隆到 H1 启动子下游； 3 、重组腺病毒质粒构建： 携带目的基因的穿梭质粒线性化后与 Adeasy-1 共转 BJ5183 感受态细胞（电转），筛选得到重组腺病毒质粒，并经 PacI 酶切鉴定：可见目的质粒出现两条条带，分别为 3.0kb 或 4.5kb 和 >23Kb 两条条带。 将得到的重组腺病毒质粒转染 DH
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