pEYFP-ER质粒

【求助】关于构建目的基因启动子序列的虫荧光素酶报告基因重组质粒的问题请教

longgyin8341 最近想做虫荧光素酶报告基因，但是从来没有做过，想求院子里高手指教： 我是要观察一种药物是否能作用于细胞内的几种核受体（NFkB，PPAR，ER（目前还不清楚究竟是哪个，需要分别试验））的启动子区域，影响这几个核受体的转录水平，从而影响细胞的一些功能（比如凋亡等）。计划将这三种核受体的启动子区域分别扩增出来，然后与虫荧光素酶（或其他报告基因）构建重组质粒。再分别转染细胞，加入药物处理，观察荧光素酶的活性，以探索药物是否

【求助】研究某个蛋白通过ER起作用的方法

gaolei 我看到一片paper是研究某个蛋白通过抑制ER信号通路，抑制乳腺癌细胞增殖。为了证明这一点，作者向不表达ER的293T细胞中转染ER，ER reporter vector和这个蛋白的表达载体。我想问的是，他为什么不向乳腺癌细胞中转染质粒呢？是因为乳腺癌细胞本身表达ER吗？这有什么影响呢？ micaixing 外源的大量转染只是为了确定一下现象在过表达中是否存在，乳腺癌细胞中ER 阴性或者阳性时ER的含量，不同

学会这些，你就是 ChIP 专家

作用。但定制抗体成本较高，并且 ChIP 验证过程失败率高达 75%。 另一种方式是给目标蛋白加标签，通过标签检测目标蛋白。AM-Tag 标签是专门针对 ChIP 设计的蛋白标签。通过质粒构建加到目标蛋白 C 端。转染进入细胞之后通过特异性 AM-tag 抗体进行 ChIP。Active Motif 实验室通过构建雌激素受体（ER）加 AM-tag 标签质粒检测 AM-tag ChIP 效果，结果数据与发表文章中使用 ER 抗体检测内源性蛋白结果一致。 没有足够的起始样本