植物总糖和还原糖(检测服务)*MAIGE实验*MT1545

还原糖的提取：

①称取植物样品0.5~3g，剪碎，加入蒸馏水约3ml匀浆，转移至烧杯或三角瓶中，用12ml蒸馏水冲洗研磨器2~3次，洗出液也转移至该容器。

②50℃水浴30min，并不时搅拌，以便还原糖彻底浸出。

③将沉淀和浸出液转移至50ml离心管，4000g离心5min。

④留取上清液，向沉淀中加入20ml蒸馏水，混匀，再次4000g离心5min。

⑤留取上清液，将2次获得的上清液合并，用蒸馏水定容至100ml(提取液)，混匀，作为还原糖待测液。

总糖的水解和提取：

①称取植物样品0.5~3g，剪碎，加入蒸馏水约3ml匀浆，转移至烧杯或三角瓶中，用12ml蒸馏水冲洗研磨器2~3次，洗出液也转移至该容器。

②向容器中加入10ml 6M盐酸溶液，搅拌均匀，煮沸30min，并不时搅拌。

③取2滴滴加于载玻片上，滴加1滴显色液(约50ul)，检查水解是否完全，如已经水解完全，则不显示蓝色。

④水解完毕后，冷却至室温，加入6M氢habitant溶液，使溶液pH至7.4，用蒸馏水定容至100ml，混匀，4000g离心5min。

⑤取上清或滤液10ml，用蒸馏水定容至100ml，成稀释10倍的总糖水解液(提取液)，取0.5ml总糖水解液，测定其还原糖的含量。

稀释葡萄糖标准：取干净离心管，按下表操作，依次获得系列浓度的Glu标准。

加样：取5ml离心管，按照下表设置空白管、标准管、测定管，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡，小心混匀；如果样品中的糖浓度过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定，样品的检测最好能设置2~3平行管，求平均值。

还原糖测定：混匀，以空白管调零，比色杯光径1cm，分光光度计测定540nm处标准管、测定管的吸光度。