超氧阴离子自由基(检测服务)*MAIGE实验*MT1500

超氧阴离子自由基检测试剂盒(磺胺比色法)又称超氧阴离子产生速率检测试剂盒，其检测原理是在酸性条件下，2份O2-与羟胺反应生成1份NO2-，NO2-在dapibus和萘胺的作用下反应生成粉红色的偶氮物质，以分光光度计测定530nm处吸光度，在一定范围内颜色深浅与O2-成正比，根据A530及NO2-和O2-的相关反应中物质的量的关系，可算出样品中O2-的浓度，主要用于测定植物组织中的超氧阴离子自由基含量或超氧阴离子的产生速率及清除能力。

1、 准备样品：

①植物样品：取正常或逆境下的新鲜植物组织，清洗干净，擦干，切碎，迅速称取1~1.5g，加入2ml预冷的O2- Lysis Buffer后冰浴条件下匀浆或研磨，4℃ 10000g离心10min，上清液即为超氧阴离子自由基提取液，4℃保存备用。

②血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可直接用于该试剂盒的测定

③高活性样品：如果样品中含有较高浓度的超氧阴离子自由基，可以使用O2- Lysis Buffer进行恰当的稀释。

2、 配制系列NO2-标准溶液：以NO2-标准(1mM)按下表继续稀释：

3、 O2-加样：按照下表设置空白管、标准管、测定管，溶液应按照顺序依次加入

4、O2-测定：以空白调零，比色杯光径1cm，分光光度计测定标准管、测定管530nm处吸光度(即为A标准、A测定)。