CARD4凋亡加强结构域蛋白4免疫组化试剂盒

产品名称：CARD4凋亡加强结构域蛋白4免疫组化试剂盒
保存条件：不使用时取试剂盒中一抗保存-20℃(避免反复冻融)，其他均保存 2-8 ℃
试剂盒特点：该试剂盒具有灵敏度高，特异性强、背景清晰、成本低廉等特点，是理想的免疫组化染色试剂盒。适用于冷冻切片、石蜡切片及固定的细胞涂片，可用于检测细胞、组织内的特异性抗原。
温馨提示：本检测试剂盒适用于人、大小鼠，兔等绝大多数组织，但对于内源性生物素含量比较丰富的组织（如肾脏、肝脏等），应选用非生物素检测系统，或用avdin 封闭。

CARD4凋亡加强结构域蛋白4免疫组化试剂盒所含试剂：
1、对应一抗，（应用：IHC-P及IHC-F=1:400-800 ）
2、内源性过氧化物酶阻断剂
3、封闭用正常山羊血清工作液
4、二抗工作液生物素标记羊抗兔IgG
5、辣根酶标记链酶卵白素工作液
6、DAB显色液 B液
7、DAB 显色液 A液
8、抗体稀释液

CARD4凋亡加强结构域蛋白4免疫组化试剂盒实验操作步骤（以石蜡切片为例）
仪器、设备：
移液枪、免疫组化笔、水浴锅、计时器、孵育湿盒、切片架、盖玻片、光学显微镜、洗瓶等。
操作步骤
1. 脱蜡水化。将石蜡切片置于新鲜二甲苯脱中浸泡 15 分钟，重复三次。去除多余的液体后，依次置于无
水乙醇、95%乙醇、90%乙醇、80%乙醇、70%乙醇，各浸泡 5 分钟，蒸馏水（或自来水）冲洗 5 分钟。
用 PBS 缓冲液（试剂 1，将干粉溶解于 2L 去离子水中）冲洗切片 5 分钟，重复三次。
2. 抗原修复。将脱蜡水化后的组织切片置于烧杯（或修复盒）中的耐高温塑料切片架上，加适量修复液 1×
柠檬酸钠抗原修复液（试剂 2，将 100×柠檬酸钠抗原修复液加去离子水稀释成 1×柠檬酸钠抗原修复液），
液面要浸过切片组织一定高度，将修复盒置于沸水中煮沸修复 15 分钟后取出玻片，自然凉至室温。用 PBS
缓冲液冲洗切片 5 分钟，重复三次。
注意：抗原修复时，修复液务必保证切片始终浸泡在液体内，一般情况：修复液的量约为 800mL/1 架。
3.阻断内源性过氧化物酶。用吸水纸擦干玻片，免疫组化笔在组织周围画圈，滴加 50μL 内源性过氧化物酶
阻断剂（试剂 3）到切片组织上以阻断内源性过氧化物酶，室温孵育 30 分钟，用 PBS 缓冲液冲洗切片 5
分钟，重复三次。
4.血清封闭。用吸水纸擦干玻片，滴加 50μL 正常山羊血清工作液（试剂 5），37℃封闭 20 分钟，以减少非
特异性染色。
5. 一抗孵育。用抗体稀释液（试剂 4）将一抗原液稀释成工作液，用吸水纸擦干玻片组织周围的液体，滴
加适量抗体工作液，置于湿盒 4℃孵育过夜或 37℃孵育 1h-2h。
6. 复温。4℃过夜后从冰箱拿出样本，在室温下孵育 15min 复温（抗体孵育为 4℃过夜选用此步骤，如室
温孵育直接进入下一步清洗）。用 PBS 缓冲液冲洗切片 5 分钟，重复三次。
7. 二抗孵育。吸水纸擦干切片后滴加 50μL 生物素标记的羊抗兔 IgG（试剂 6），37℃孵育 20 分钟，用 PBS
缓冲液冲洗切片 5 分钟，重复三次。
8. 三抗孵育。吸水纸擦干切片后滴加 50μL 辣根酶标记的链酶卵白素孵育（试剂 7），37℃孵育 20 分钟，
用 PBS 缓冲液冲洗切片 5 分钟，重复三次。
9. 显色。甩去 PBS 缓冲液，吸水纸擦干切片； 每张切片滴加新鲜配制的 DAB 工作液 50μL（试剂 8：试
剂 9：试剂 1=1:1:18 比例配置），孵育 3-5min，光学显微镜下观察染色结果，切勿显色过深；显色后用自
来水冲洗切片终止显色。
10. 复染。滴加适量苏木素染液（试剂 10）复染，孵育 1-5 分钟，自来水冲洗 5 分钟，滴加盐酸酒精分化
液分化 30 秒，自来水冲洗。
11. 脱水封片。将玻片依次置于 70%乙醇、80%乙醇、90%乙醇、95%乙醇、无水乙醇，各浸泡 5 分钟，
再将玻片放入二甲苯中浸泡 15 分钟，重复三次。玻片取出来稍晾干，用中性树胶封片。
结果判断
在光学显微镜下对染色的切片观察并判断。苏木素染细胞核为蓝色，DAB 显色的阳性表达为棕黄色。

CARD4凋亡加强结构域蛋白4免疫组化试剂盒注意事项
1. 检测样本时需同时做阴性对照和阳性对照，否则结果不可取。
2. 本品中的配套试剂，请不要用其他生产商产品替换使用。
3. DAB 为致癌物质，请采取必要的防范措施，现用现配。
4. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗。
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