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- 2026年01月29日
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一、实验材料与仪器
实验动物：Wistar大鼠。
主要试剂：
抗Thy1.1单克隆抗体（如mAb1-22-3或mAb OX-7）。
静脉注射用生理盐水。
仪器设备：
尾静脉注射器。
显微镜（用于观察肾脏病理变化）。
尿蛋白检测设备。
二、实验步骤
1. 抗体准备
使用抗Thy1.1单克隆抗体（如mAb1-22-3或mAb OX-7），确保抗体的纯度和效价。
2. 尾静脉注射
单次注射：
将mAb1-22-3（500 μg）通过尾静脉单次注射到Wistar大鼠体内。
注射后，大鼠会立即出现蛋白尿，尿蛋白在第3~5天达到高峰，随后逐渐下降。
两次注射（不可逆模型）：
第一次注射后，间隔2周进行第二次尾静脉注射mAb1-22-3。
第二次注射后，大鼠的蛋白尿水平持续保持在较高水平（约155 mg/d），并出现典型的不可逆性肾小球硬化。
3. 观察指标
尿蛋白检测：每日检测尿蛋白水平，记录蛋白尿的变化情况。
肾脏病理检查：
在注射后第3天、第7天等时间点，取肾脏组织进行病理切片。
使用HE染色和PAS染色观察肾小球系膜细胞的增殖和基质沉积情况。
免疫组化检测系膜区PCNA（增殖细胞核抗原）和Bcl-2（凋亡调节基因）的表达。
三、模型特点
病理特征：补体依赖性系膜溶解、肾小球内炎症细胞浸润、系膜细胞增殖和细胞外基质沉积。
临床表现：大鼠出现显著的蛋白尿，部分肾小球可形成新月体。
模型类型：
单次注射诱导的模型为可逆性，病理变化与人类系膜增生性肾小球肾炎的早期病变相似。
两次注射诱导的模型为不可逆性，更接近人类疾病的晚期阶段。
四、注意事项
注射操作：确保尾静脉注射操作准确，避免药物外渗。
观察时间点：在注射后30分钟、24~48小时、4~6天等关键时间点观察病理变化。
模型选择：根据研究目的选择单次注射（可逆性）或两次注射（不可逆性）模型。
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)1小时； 2)2％H2O2／甲醇处理(可省略)，室温20分钟，封闭内源性过氧化物酶活性； 3)PBS漂洗后1％BSA室温孵育15分钟； 4)特异性抗体(第一抗体)室温孵育3小时或4℃孵育过夜； 5)PBS充分漂洗后，HRP或生物素标记的第二抗体室温孵育30―60分钟，如系生物素标记的第二抗体 ，反应后则需进一步按ABC试剂盒要求操作； 6)PBS漂洗后，1％戊二醛0．1m01／LPB配制固定30―60分钟，PBS漂洗； 7)呈色反应：0．
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