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- 烜雅生物
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- 国产
- 2026年01月09日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
222
- 英文名：
Infectious Hematopoietic Necrosis Virus Detection Kit
- 保质期：
12个月
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 保存条件：
-20℃
- 规格：
50T
【产品名称】
商品名称：传染性造血器官坏死病毒（IHNV）核酸检测试剂盒（探针法荧光PCR）
Name ：Infectious Hematopoietic Necrosis Virus Detection Kit (Real-Time PCR Method)
【包装规格】25T/盒、50T/盒
【预期用途】 传染性造血器官坏死病是一种由传染性造血器官坏死病毒（Infectious Hematopoietic Necrosis Virus, IHNV） 引起鲑、鳟鱼类发病的一种病毒性传染病。该病常导致淡水渔场中虹鳟鱼苗、鲑科鱼苗或者幼鱼出现严重的临床症状，常以暴行流行的形式出现，并且感染后死亡率较高，通常达 90~95%。该病临床症状为：病鱼初期表现为游动迟缓、昏睡，有时表现为狂游、转圈游动等神经症状。病鱼体色发黑，鳃丝苍白、眼球突出、腹部膨胀，鳍基充血，不透明的黏液状管型粪便悬挂于肛门。剖解可见病鱼肝脏、脾脏和肾脏等器官苍白贫血，胃内空虚，肠道等器官有出血点，存活下来的鱼常出现脊柱畸形。该病被列入 OIE 水生动物疫病名录，我国农业部也将之列为二类动物疫病。 本试剂盒适用于检测的鱼的脑、肝、肾、脾、腮等组织、雌鱼的卵巢液等标本中传染性造血器官坏死病毒 RNA，适用于传染性造血器官坏死病毒感染的辅助诊断。
【检验原理】 本试剂盒对传染性造血器官坏死病毒基因设计特异性的引物和探针，用一步法荧光 RT-PCR 技术对传染性造血器官坏死病毒 RNA 进行体外扩增检测，用于科研实验中对可疑感染者的病原学检测。
【试剂组成】
注：1）不同批号试剂不能混用。2）试剂盒内各试剂组份足够包装规格所标示的检测次数。
【储存条件及有效期】 -20℃±5℃，避光保存、运输、反复冻融次数不超过 5 次，有效期 12 个月。
【适用仪器】 ABI 、安捷伦 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列荧光定量 PCR 检测仪。
【标本采集】 对于有临床症状的鱼，如体长不大于 4cm，取整条鱼，体长 4~6cm 的鱼，取内脏（包括肾）；体长大于 6cm 的鱼则取脑、肝、肾、脾；对于无症状的鱼，取肾、脾、腮和脑组织，成熟雌鱼还需取卵巢液。
【保存和运输】 上述标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-70℃，但不能超过 6 个月，标本运送应采用 2~8℃冰袋运输，严禁反复冻融。
【使用方法】
1. 样品处理（样本处理区）
1.1 样本前处理 称取组织样品约 1g，手术剪剪碎混匀后取 0.5g 于研磨器中研磨，加入 1.5mL 生理盐水后继续研磨，待匀浆后转至 1.5mL 灭菌离心管中，8000rpm 离心 2min，取上清液 100μL 于 1.5mL 灭菌离心管中；卵巢液直接取 100μL。
1.2 核酸提取 推荐采用上海烜雅生物科技有限公司生产的核酸提取或纯化试剂（磁珠法或离心柱法）进行核酸提 取，请按照试剂说明书进行操作。
2. 试剂配制（试剂准备区） 根据待检测样本总数，设所需要的 PCR 反应管管数为 N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照；反应管数每满 10 份，多配制 1 份)，每测试反应体系配制如下表：
将混合好的测试反应液分装到 PCR 反应管中，21uL/管。
3. 加样（样本处理区） 将步骤 1 提取的核酸、阳性质控品、阴性质控品各取 4μL，分别加入相应的反应管中，盖好管盖，混匀， 短暂离心。
4. PCR 扩增（核酸扩增区）
4.1 将待检测反应管置于荧光定量 PCR 仪反应槽内；
4.2 设置好通道、样品信息，反应体系设置为 25μL；荧光通道选择： 检测通道（Reporter Dye）FAM， 淬灭通道（Quencher Dye）NONE，ABI 系列仪器请勿选择 ROX 参比荧光，选择 None 即可。
4.3 推荐循环参数设置：
5. 结果分析判定
5.1 结果分析条件设定 设置 Baseline 和 Threshold：一般直接按机器自动分析的结果分析，当曲线出现整体倾斜时，根据分析后图像调节 Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范围内调节)、stop 值(一般可在 5~20 范围内调节)，以及 Threshold 的 Value 值(上下拖动阈值线至高于阴性对照)，重新分析结果。
5.2 结果判断 阳性：检测通道 Ct 值≤35，且曲线有明显的指数增长曲线； 可疑：检测通道 3538 或无 Ct 值。
6. 质控标准 阴性质控品：Ct 值>38 或无 Ct 值；阳性质控品：扩增曲线有明显指数生长期，且 Ct 值≤32； 以上条件应同时满足，否则实验视为无效。
7. 检测方法的局限性
1. 样本检测结果与样本收集、处理、运送以及保存质量有关；
2. 样本提取过程中没有控制好交叉污染，会出现假阳性结果；
3. 阳性对照、扩增产物泄漏，会导致假阳性结果；
4. 病原体在流行过程中基因突变、重组，会导致假阴性结果；
5. 不同的提取方法存在提取效率差异，会导致假阴性结果；
6. 试剂运输，保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降，出现假阴性或定量检测不准确的结果；
7. 本检测结果仅供参考，如须确诊请结合临床症状以及其他检测手段。
【注意事项】
1. 所有操作严格按照说明书进行；
2. 试剂盒内各种组分使用前应自然融化，完全混匀并短暂离心；
3. 反应液应避光保存；
4. 反应中尽量避免气泡存在，管盖需盖紧；
5. 使用一次性吸头、一次性手套和各区专用工作服；
6. 样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行，以免交叉污染；
7. 实验完毕后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器；
8. 试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。
传染性造血器官坏死病毒（IHNV）核酸检测试剂盒（探针法荧光PCR）相关产品：
商品名称：传染性造血器官坏死病毒（IHNV）核酸检测试剂盒（探针法荧光PCR）
Name ：Infectious Hematopoietic Necrosis Virus Detection Kit (Real-Time PCR Method)
【包装规格】25T/盒、50T/盒
【预期用途】 传染性造血器官坏死病是一种由传染性造血器官坏死病毒（Infectious Hematopoietic Necrosis Virus, IHNV） 引起鲑、鳟鱼类发病的一种病毒性传染病。该病常导致淡水渔场中虹鳟鱼苗、鲑科鱼苗或者幼鱼出现严重的临床症状，常以暴行流行的形式出现，并且感染后死亡率较高，通常达 90~95%。该病临床症状为：病鱼初期表现为游动迟缓、昏睡，有时表现为狂游、转圈游动等神经症状。病鱼体色发黑，鳃丝苍白、眼球突出、腹部膨胀，鳍基充血，不透明的黏液状管型粪便悬挂于肛门。剖解可见病鱼肝脏、脾脏和肾脏等器官苍白贫血，胃内空虚，肠道等器官有出血点，存活下来的鱼常出现脊柱畸形。该病被列入 OIE 水生动物疫病名录，我国农业部也将之列为二类动物疫病。 本试剂盒适用于检测的鱼的脑、肝、肾、脾、腮等组织、雌鱼的卵巢液等标本中传染性造血器官坏死病毒 RNA，适用于传染性造血器官坏死病毒感染的辅助诊断。
【检验原理】 本试剂盒对传染性造血器官坏死病毒基因设计特异性的引物和探针，用一步法荧光 RT-PCR 技术对传染性造血器官坏死病毒 RNA 进行体外扩增检测，用于科研实验中对可疑感染者的病原学检测。
【试剂组成】
| 包装规格 | 50T/盒 |
| IHNV 反应液 | 500μL×2 管 |
| 酶液 | 50μL×1 管 |
| IHNV 阳性质控品 | 50μL ×1 管 |
| 阴性质控品 | 250μL ×1 管 |
【储存条件及有效期】 -20℃±5℃，避光保存、运输、反复冻融次数不超过 5 次，有效期 12 个月。
【适用仪器】 ABI 、安捷伦 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列荧光定量 PCR 检测仪。
【标本采集】 对于有临床症状的鱼，如体长不大于 4cm，取整条鱼，体长 4~6cm 的鱼，取内脏（包括肾）；体长大于 6cm 的鱼则取脑、肝、肾、脾；对于无症状的鱼，取肾、脾、腮和脑组织，成熟雌鱼还需取卵巢液。
【保存和运输】 上述标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-70℃，但不能超过 6 个月，标本运送应采用 2~8℃冰袋运输，严禁反复冻融。
【使用方法】
1. 样品处理（样本处理区）
1.1 样本前处理 称取组织样品约 1g，手术剪剪碎混匀后取 0.5g 于研磨器中研磨，加入 1.5mL 生理盐水后继续研磨，待匀浆后转至 1.5mL 灭菌离心管中，8000rpm 离心 2min，取上清液 100μL 于 1.5mL 灭菌离心管中；卵巢液直接取 100μL。
1.2 核酸提取 推荐采用上海烜雅生物科技有限公司生产的核酸提取或纯化试剂（磁珠法或离心柱法）进行核酸提 取，请按照试剂说明书进行操作。
2. 试剂配制（试剂准备区） 根据待检测样本总数，设所需要的 PCR 反应管管数为 N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照；反应管数每满 10 份，多配制 1 份)，每测试反应体系配制如下表：
| 试剂 | IHNV 反应液 | 酶液 |
| 用量（样本数为 N） | 20μL | 1μL |
3. 加样（样本处理区） 将步骤 1 提取的核酸、阳性质控品、阴性质控品各取 4μL，分别加入相应的反应管中，盖好管盖，混匀， 短暂离心。
4. PCR 扩增（核酸扩增区）
4.1 将待检测反应管置于荧光定量 PCR 仪反应槽内；
4.2 设置好通道、样品信息，反应体系设置为 25μL；荧光通道选择： 检测通道（Reporter Dye）FAM， 淬灭通道（Quencher Dye）NONE，ABI 系列仪器请勿选择 ROX 参比荧光，选择 None 即可。
4.3 推荐循环参数设置：
| 步骤 | 循环数 | 温度 | 时间 | 收集荧光信号 |
| 1 | 1 cycle | 42℃ | 20min | 否 |
| 2 | 1 cycle | 95℃ | 10min | 否 |
| 3 | 40 cycle | 94℃ | 15sec | 否 |
| 55℃ | 30sec | 是 |
5.1 结果分析条件设定 设置 Baseline 和 Threshold：一般直接按机器自动分析的结果分析，当曲线出现整体倾斜时，根据分析后图像调节 Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范围内调节)、stop 值(一般可在 5~20 范围内调节)，以及 Threshold 的 Value 值(上下拖动阈值线至高于阴性对照)，重新分析结果。
5.2 结果判断 阳性：检测通道 Ct 值≤35，且曲线有明显的指数增长曲线； 可疑：检测通道 35
6. 质控标准 阴性质控品：Ct 值>38 或无 Ct 值；阳性质控品：扩增曲线有明显指数生长期，且 Ct 值≤32； 以上条件应同时满足，否则实验视为无效。
7. 检测方法的局限性
1. 样本检测结果与样本收集、处理、运送以及保存质量有关；
2. 样本提取过程中没有控制好交叉污染，会出现假阳性结果；
3. 阳性对照、扩增产物泄漏，会导致假阳性结果；
4. 病原体在流行过程中基因突变、重组，会导致假阴性结果；
5. 不同的提取方法存在提取效率差异，会导致假阴性结果；
6. 试剂运输，保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降，出现假阴性或定量检测不准确的结果；
7. 本检测结果仅供参考，如须确诊请结合临床症状以及其他检测手段。
【注意事项】
1. 所有操作严格按照说明书进行；
2. 试剂盒内各种组分使用前应自然融化，完全混匀并短暂离心；
3. 反应液应避光保存；
4. 反应中尽量避免气泡存在，管盖需盖紧；
5. 使用一次性吸头、一次性手套和各区专用工作服；
6. 样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行，以免交叉污染；
7. 实验完毕后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器；
8. 试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。
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文献和实验该产品被引用文献
[1] 国家质量监督检验检疫总局. SN/T 1474-2014 传染性造血器官坏死病检疫技术规范[S]. 北京：科学出版社, 2014. [2] 徐立蒲, 王小亮, 杨丽文, 等. 传染性造血器官坏死病诊断及防控的研究进展[J]. 中国畜牧兽医, 2013, 40(3): 209-215. [3] 徐黎明, 刘红柏, 徐进, 等. 传染性造血器官坏死病病毒高效 RT-PCR 检测方法的建立[J]. 水生生物学报, 2013, 37(6): 1164-1168.
相关实验
传染性皮下及造血组织坏死病毒（Infectious hypodermal and hematopoietic necrosis virus，IHHNV）属细小病毒科，病毒粒子直径约20纳米，单链DNA，该病毒感染外胚层组织，如鳃、表皮、前后肠上皮细胞、神经索和神经节，以及中胚层器官，如造血组织、触角腺、性腺、淋巴器官、结缔组织和横纹肌，在宿主细胞核内形成包涵体。对虾传染性皮下及造血组织坏死病，又名慢性矮小残缺综合征（runt-deformity syndrome，RDS），1981年在美国
文献支持
传染性造血器官坏死病毒（IHNV）核酸检测试剂盒（探针法荧光PCR）
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