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- 烜雅生物
- XY-PCR367C
- 国产
- 2026年04月20日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
299
- 英文名：
Shigella spp/ Salmonella spp Detection Kit
- 保质期：
12个月
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 保存条件：
-20℃
- 规格：
50T
商品名称：志贺氏菌/沙门氏菌（SH/SPP）核酸检测试剂盒（探针法荧光PCR）
Name ：Shigella spp/ Salmonella spp Detection Kit （Real-Time PCR Method）
【包装规格】25T/盒、50T/盒
【预期用途】 沙门氏菌（Salmonella spp） 是肠杆菌科中一大类重要的致病菌，感染畜禽后可引起一系列的疾病，成为畜禽肉胴体、畜禽产品污染的重要来源，并可以通过各种途径传染给人，引起人的食源性疾病。志贺氏菌（Shigella spp.）通称痢疾杆菌，是一类具有高度传染性的肠道致病菌。志贺氏菌主要通过消化道途径传播，侵袭肠上皮细 胞，引起以发热、腹痛、腹泻为特征的典型痢疾症状，严重危害人类健康。 本试剂盒适用于检测水样粪便，疑似污染的水、食物等样本中的沙门氏菌以及志贺氏菌，用于沙门氏菌以及 志贺氏菌感染的辅助诊断。
【检验原理】 本试剂盒采用 TaqMan 探针法实时荧光 PCR 技术，分别设计一对沙门氏菌以及志贺氏菌特异性引物，结合一条特异性探针，用荧光 PCR 技术对沙门氏菌以及志贺氏菌的 DNA 进行体外扩增检测，用于科研实验中对可疑感染病料的病原学检测。
【试剂组成】
| 包装规格 | 50T/盒 |
| SH/SPP 反应液 | 500μL×2 管 |
| 酶液 | 50μL×1 管 |
| SH/SPP 阳性质控品 | 50μL ×1 管 |
| 阴性质控品 | 250μL ×1 管 |
【储存条件及有效期】 -20℃±5℃，避光保存、运输、反复冻融次数不超过 5 次，有效期 12 个月。
【适用仪器】 ABI7500、安捷伦 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列荧光定量 PCR 检测仪。
【标本采集】 水样便取 0.5~1mL；疑似污染的食物取 1g。
【保存和运输】 采集或处理好的样品在 2℃~8℃条件下保存应不超过 24 h；若需长期保存，应放置-70℃以下保存，冻融不超过 3 次。
【使用方法】
1. 样品处理（样本处理区）
1.1 样本前处理 水样便 13000 rpm 离心 2min，去尽上清；疑似污染的食物用手术剪剪碎混匀后取 0.5g 于研磨器中研磨，加入1.5mL 生理盐水后继续研磨，待匀浆后转至 1.5mL 灭菌离心管中，8000rpm 离心 2min，取上清液 100μL 于 1.5mL 灭菌离心管中；疑似污染的水直接取 100μL。
1.2 核酸提取 推荐采用上海烜雅生物科技有限公司生产的核酸提取或纯化试剂（磁珠法或离心柱法）进行核酸提取，请 按照试剂说明书进行操作。
2. 试剂配制（试剂准备区） 根据待检测样本总数，设所需要的 PCR 反应管管数为 N（N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照；反应管数每满 10 份，多配制 1 份），每测试反应体系配制如下表：
| 试剂 | SH/SPP 反应液 | 酶液 |
| 用量（样本数为 N） | 19μL | 1μL |
3. 加样（样本处理区） 将步骤 1 提取的核酸、阳性质控品、阴性质控品各取 5μL，分别加入相应的反应管中，盖好管盖，混匀，短暂离心。
4. PCR 扩增（核酸扩增区）
4.1 将待检测反应管置于荧光定量 PCR 仪反应槽内；
4.2 设置好通道、样品信息，反应体系设置为 25μL； 荧光通道选择： 检测通道（Reporter Dye）FAM，VIC 淬灭通道（Quencher Dye）NONE，ABI 系列仪器请勿选择 ROX 参比荧光，选择 None 即可。
4.3 推荐循环参数设置：
| 步骤 | 循环数 | 温度 | 时间 | 收集荧光信号 |
| 1 | 1 cycle | 95℃ | 2min | 否 |
| 2 | 45 cycle | 95℃ | 15sec | 否 |
| 60℃ | 30sec | 是 |
5.1 结果分析条件设定（请参照各仪器使用说明书进行设置，以分析 ABI7500 仪器为例） 反应结束后自动保存结果，根据分析后图像调节 Baseline 的 Start 值、End 值以及 Threshold 值（用户可根据实际情况自行调整，Start 值可设在 3～15、End 值可设在 5～20，使阈值线位于扩增曲线指数期，阴性质控品的扩增曲线平直或低于阈值线），点击 Analyze 自动获得分析结果。
5.2 结果判断 FAM 通道为志贺氏菌检测结果，VIC 通道为沙门氏菌检测结果。阳性：检测通道 Ct 值≤40，且曲线有明显的指数增长曲线； 阴性：样本检测结果无 Ct 值，且无特异性扩增曲线； 可疑：样本检测结果 40＜Ct 值≤45，建议重复检测，如果检测通道仍为 40
5.3 质控标准 阴性质控品：无特异性扩增曲线或无 Ct 值显示； 阳性质控品：扩增曲线有明显指数增长期，且 Ct 值≤32； 以上条件应同时满足，否则实验视为无效。
6. 检测方法的局限性
1. 样本检测结果与样本收集、处理、运送以及保存质量有关；
2. 样本提取过程中没有控制好交叉污染，会出现假阳性结果；
3. 阳性对照、扩增产物泄漏，会导致假阳性结果；
4. 病原体在流行过程中基因突变、重组，会导致假阴性结果；
5. 不同的提取方法存在提取效率差异，会导致假阴性结果；
6. 试剂运输，保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降，出现假阴性或定量检测不准确的结果；
7. 本检测结果仅供参考，如须确诊请结合临床症状以及其他检测手段。
【注意事项】
1. 所有操作严格按照说明书进行；
2. 试剂盒内各种组分使用前应自然融化，完全混匀并短暂离心；
3. 反应液应避光保存；
4. 反应中尽量避免气泡存在，管盖需盖紧；
5. 使用一次性吸头、一次性手套和各区专用工作服；
6. 样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行，以免交叉污染；
7. 实验完毕后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器；
8. 试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。
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文献和实验治疗。重度中毒者应同时加强支持疗法。 5. N，N‘-亚甲双丙烯酰胺（甲叉双丙烯酰胺） 可用作制备聚丙烯酰胺凝胶的交联剂，生物高分子化合物（蛋白质、多肽、核酸）的分离 具有取代基丙烯酰胺，因此具有一定的毒性。能轻微刺激眼睛、皮肤和粘膜。应避免与人体长时间直接接触。误触应用清水洗净。 有毒，毒性小，影响中枢神经系统，切勿吸入粉末。 6. DTT 二硫苏糖醇 DTT的用途之一是作为巯基化DNA的还原剂和去保护剂。巯基化DNA末端硫原子在溶液中趋向于形成二聚体，特别是在存在氧
群体的染色体组，按其大小、着丝点的位子及个别染色体的分带型式排列。正常人的核型含46个染色体，包括22对的称为常染色体（自第1至第22对）同源染色体和一对称为X和Y（在女性为XX，在男性为XY）性染色体。核型的描述包括下列项目，用逗号（，）分开：染色体总数、性染色体结构，及在异常核型，还包括性染色体异常及常染色体异常。 Kilobace(kb） 千碱基，核酸大小的单位，等于1000个DNA的碱基对或1000个RNA的碱基。 Kinase 激酶，任何把一个
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