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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
200
- 英文名:
Infectious Hematopoietic Necrosis Virus Detection Kit
- 保质期:
12个月
- 供应商:
上海晅科生物科技有限公司
- 保存条件:
-20℃
- 规格:
50T
Name : Infectious Hematopoietic Necrosis Virus Detection Kit
精准检测 | 快速诊断 | 助力科研
本试剂盒对传染性造血器官坏死病毒基因设计特异性的引物和探针[1,3],用一步法荧光 RT-PCR 技术对传染性造血器官坏死病毒 RNA 进行体外扩增检测,用于对可疑感染者的病原学诊断。
技术参数
项目 参数详情
检测方法 荧光定量PCR/LAMP/RPA-LFD(可选)
保存条件 -20℃避光保存,有效期12个月,避免反复冻融(≤5次)
适用仪器 ABI7500、安捷伦 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列荧光定量 PCR 检测仪。
样本类型 对于有临床症状的鱼,如体长不大于 4cm,取整条鱼,体长 4~6cm 的鱼,取内脏(包括肾);体长大于 6cm 的鱼则取脑、肝、肾、脾;对于无症状的鱼,取肾、脾、腮和脑组织,成熟雌鱼还需取卵巢液。
保存和运输 上述标本短期内可保存于-20℃,长期保存可置-70℃,但不能超过 6 个月,标本运送应采用 2~8℃冰袋运输,严禁反复冻融。
操作流程(以荧光PCR为例)
1. 样本处理:称取组织样品约 1g,手术剪剪碎混匀后取 0.5g 于研磨器中研磨,加入 1.5mL 生理盐水后继续研磨,待匀浆后转至 1.5mL 灭菌离心管中,8000rpm 离心 2min,取上清液 100μL 于 1.5mL 灭菌离心管中;卵巢液直接取 100μL。
2. 试剂配制:加入预混反应液、酶及模板,离心混匀。
3. 扩增检测:运行预设程序(如:95℃预变性2min,95℃ 15s→60℃ 30s,45循环),分析Ct值。
结果判读
阳性:检测通道 Ct 值≤40,且曲线有明显的指数增长曲线;
阴性:样本检测结果 Ct 值>40 或无 Ct 值。
- 严格质控标准:每批次试剂通过灵敏度、重复性、特异性验证。
- 配套服务:提供技术培训、实验方案优化及数据分析支持。
应用案例
- 科研机构研究
检测方法的局限性
1. 样本检测结果与样本收集、处理、运送以及保存质量有关;
2. 样本提取过程中没有控制好交叉污染,会出现假阳性结果;
3. 阳性对照、扩增产物泄漏,会导致假阳性结果;
4. 病原体在流行过程中基因突变、重组,会导致假阴性结果;
5. 不同的提取方法存在提取效率差异,会导致假阴性结果;
6. 试剂运输,保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降,出现假阴性或定量检测不准确的结果;
7. 本检测结果仅供参考,如须确诊请结合临床症状以及其他检测手段。
注意事项
1. 所有操作严格按照说明书进行;
2. 试剂盒内各种组分使用前应自然融化,完全混匀并短暂离心;
3.反应液应避光保存;
4.反应中尽量避免气泡存在,管盖需盖紧;
5.使用一次性吸头、一次性手套和各区专用工作服;
6. 样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行,以免交叉污染;
7.实验完毕后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器;
8.试剂盒里所有物品应视为污染物对待,并按照《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。
9.本产品仅供科研。
参考文献
[1] 国家质量监督检验检疫总局. SN/T 1474-2014 传染性造血器官坏死病检疫技术规范[S]. 北京:科学出版社, 2014.
[2] 徐立蒲, 王小亮, 杨丽文, 等. 传染性造血器官坏死病诊断及防控的研究进展[J]. 中国畜牧兽医, 2013, 40(3): 209-215.
[3] 徐黎明, 刘红柏, 徐进, 等. 传染性造血器官坏死病病毒高效 RT-PCR 检测方法的建立[J]. 水生生物学报, 2013, 37(6): 1164-1168.
传染性造血器官坏死病是一种由传染性造血器官坏死病毒(Infectious Hematopoietic Necrosis Virus, IHNV) 引起鲑、鳟鱼类发病的一种病毒性传染病。该病常导致淡水渔场中虹鳟鱼苗、鲑科鱼苗或者幼鱼出现严重的临床症状,常以暴行流行的形式出现,并且感染后死亡率较高,通常达 90~95%。该病临床症状为:病鱼初期表现为游动迟缓、昏睡,有时表现为狂游、转圈游动等神经症状。病鱼体色发黑,鳃丝苍白、眼球突出、腹部膨胀,鳍基充血,不透明的黏液状管型粪便悬挂于肛门。剖解可见病鱼肝脏、脾脏和肾脏等器官苍白贫血,胃内空虚,肠道等器官有出血点,存活下来的鱼常出现脊柱畸形。该病被列入 OIE 水生动物疫病名录,我国农业部也将之列为二类动物疫病。 本试剂盒适用于检测的鱼的脑、肝、肾、脾、腮等组织、雌鱼的卵巢液等标本中传染性造血器官坏死病毒 RNA,适用于传染性造血器官坏死病毒感染的辅助诊断。
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文献和实验传染性皮下及造血组织坏死病毒(Infectious hypodermal and hematopoietic necrosis virus,IHHNV)属细小病毒科,病毒粒子直径约20纳米,单链DNA,该病毒感染外胚层组织,如鳃、表皮、前后肠上皮细胞、神经索和神经节,以及中胚层器官,如造血组织、触角腺、性腺、淋巴器官、结缔组织和横纹肌,在宿主细胞核内形成包涵体。对虾传染性皮下及造血组织坏死病,又名慢性矮小残缺综合征(runt-deformity syndrome,RDS),1981年在美国
。在所有生物体范围内,基因不同却有100,000范围上的交叠,一个普通的原则非常重要。DNA编码那些生物体细胞必须合成的蛋白,同时蛋白(直接或间接地)提供了细胞生存所需的功能,基因的总数显很难去估计的(在23章中将会详细讲到一个组织)。最小的生物体,支原体,其基因组的大小仅为病毒的两倍。同样病毒的基因信息也是DNA或RNA,核酸编码了那些用于包裹基因和感染过程中用于重新产生宿主细胞的蛋白(最小的随体烟草坏死病毒就不能被单独复制,必须同时需要一个“帮助”病毒:烟草坏死病毒,它是一个传染性的病毒)。 类病毒
及教学系统多媒体软件等。 ○将显微镜与微机相连,应用储存、分类、检索软件,编辑、打印诊断报告,并可附多幅细胞 图象 。 二. 血细胞形态学基本概念 血细胞形态学作为临床血液病基础诊断: ● 观察血细胞形态和数量及其比例的变化来研究造血器官的结构和功能是血液学的重要组成部分,是诊断造血系统疾病最基本、最简便实用的检查方法,被临床普遍应用。 ● 正常人的血液及造血器官中,各种血细胞的数量有一定的正常范围,不同血细胞及细胞发育的不同阶段有一定形态结构特点。 ● 在造血
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