Cytiva/GE CAPTO S, 25 ML 货号:17

【原创】蛋白质纯化武器—工艺篇（欢迎补充）

用EDTA将柱脱镍再生了。 镍柱在上样后的缓冲液淋洗阶段，峰往往很拖尾，要耐得住性子，让它淋洗完全。 此柱的融合蛋白载量大约为20mg/ml。不同的镍柱，不同的蛋白，载量也是不同的。 经过一步Chelating Sepharose FF纯化，融合蛋白的SDS-PAGE纯度大约为90%。 （3）Sephadex G-25（fine）换液 pH8.0，20mM PB做缓冲液置换。更换Chelating柱洗脱融合蛋白的溶液体系，使得适合肠激酶酶切的要求。 点评：Sephadex G-25

蛋白质纯化武器—工艺篇

量大，对温度非常敏感的蛋白慎用。 超声破菌：以10g湿菌体为例，加入破菌缓冲液100ml，玻璃烧杯中磁力搅拌悬浮充分。冰水浴超声。设置超声时间4s，间隙时间4s，超声功率400-600W，超声次数100-200次。 压力匀浆：以200g湿菌体为例，加入4℃预冷的破菌缓冲液3000ml，用分散乳化机充分混匀。匀浆压力800bar左右，压力匀浆发热非常大，流出液要冰水浴加磁力搅拌。一次匀浆完毕后，让菌液充分冷却后再进行二次匀浆。匀浆完毕的菌液如果粘度比较大，可用超声破碎仪超声40次，打碎核酸减小粘度

类器官培养与应用——血管类器官

用1ml枪头吹打避免过度聚合。 10、重复步骤 8，将培养基替换为中胚层分化培养基-2，放置在 37℃，5％CO2 培养箱中孵育 2 天。   血管类器官形成 11、将冻存的 Matrigel 在 4℃ 下过夜解冻，在 12 孔板中每孔铺 0.5ml  第一层胶原（1.5mg/ml collagen I+ 25％ Matrigel），轻轻旋转孔板使溶液分布均匀。 12、将 12 孔板放置在 37℃ 条件下固化 2 小时。 13、按照步骤 8 收取细胞沉淀，加入 1ml StemPro-34 SFM