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文献和实验疏水相互作用层析原理 疏水作用层析原理是根据生物分子的疏水性差异进行分离。当生物分子通过疏水作用层析介质的时候,生物分子的疏水基团与层析介质的疏水配基相互作用,之后通过降低缓冲液的疏水性来进行洗脱,从而使生物分子通过疏水作用产生分离,纯化获得目标样品。 特色 属于其他层析技术的互补技术 高选择性,特别适用于疏水性高的目的物分离纯化 由于需要高盐条件,易使蛋白沉淀、变性,因此其应用范围受限 属于吸附性层析类型,具有浓缩作用 操作环境的温度对层析过程及结果的影响较大 适于疏水性强的蛋白、耐
溶液对柱子进行清洗。(如果出现载量严重下降或者压力增加,需考虑彻底清洗) CIP(彻底清洗) 常规柱子(除了Ni excel)如出现反压严重升高或者柱子明显颜色改变,说明柱子需要进行彻底的清洗。 1. 脱镍: (1) 脱镍缓冲液:20mM 磷酸缓冲液,0.5M NaCl,50mM EDTA,pH 7.4。 (2) 使用5-10个柱体积的脱镍缓冲液冲洗柱子, (3) 然后再用5-10个柱体积的水冲洗柱子。 2. 去除沉淀蛋白、疏水性蛋白及脂蛋白:将柱子置换到1M NaOH中,室温1-2小时(若需
率大于58%,这一工艺的开发造福社会同时为用户带来安全高效的纯化方案。 将粗糖通过Capto adhere 和Capto DEAE 两种层析介质串联,流穿模式进行分离纯化的。Capto 骨架的介质具有很好的刚性和载量,对于多糖这样大分子的物质仍然有很好的通量。Adhere 是复合模式的配基,同时具有弱阴离子交换与疏水作用, DEAE则是弱阴离子交换层析填料。 下面是流脑多糖的纯化路线图: 通过层析图206nm 和A280nm 吸收可以看出通过层析纯化可以将多糖与蛋白分开,达到多糖与蛋白核酸的分离
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