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【北京泽平是思拓凡Cytiva一级代理商,具备20年销售服务经验,提供各类试剂、耗材、仪器、软件、服务等一站式解决方案。rS9rk\l,;K)Pd%#m(X"/iL~N$Bj2q(\S*V(XH8XAk_Zb|;1)kma,'N1&zP]&PF7rO^)
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文献和实验问: 1.DEAE FAST FLOW经过不同盐浓度洗脱后,在用初始缓冲液平衡柱子过程中,缓冲液的体积和平衡时间与什么有关?我要的蛋白等电点是4.5,用的是PH7.5的20mMTris-HCl缓冲液平衡,而且我用的是5ML的预装柱,洗脱后平衡得需要大约120ML的缓冲液,我看说明书写的只需5-6个柱体积,这是为什么呢? 2.如果自己装的DEAE FAST
中胶会有很多气泡,可以用真空或超声波进行脱气,静止,就可以进行装柱了。 (1) 凝胶柱的装填 将层析柱 (Φ2.6×20cm)于地面垂直固定在架子上,下端流出口用夹子夹紧,柱顶可安装一个带有搅拌装置的较大容器,柱内充满洗脱液,将溶胀后的DEAE-Sepharose Fast Flow凝胶调成较稀薄的浆液盛于柱顶的容器中,然后在轻微搅拌下使凝胶下沉于柱内,这样凝胶粒水平上升,直到所需高度为止,拆除柱顶装置,稍放置一段时间,再开始流动平衡,流速应低于层析时所需的流速
多糖的同时需要尽可能多地去除菌体的蛋白,以减少疫苗的副反应,现行的疫苗制造工艺均采用十六烷基三甲基溴化铵沉淀多糖,加入乙醇沉淀去除核酸以及回收多糖,得到粗制多糖。粗制多糖溶解后加入苯酚使蛋白变性析出,根据粗制多糖中含有的蛋白的情况,此步骤通常需要重复一至三次。苯酚具有很强的毒性给生产操作者的健康带来威胁,对环境具有严重危害,其残留也影响制品的质量,并且苯酚抽提的方法也不适合大规模工业化生产操作。因此GE 公司开发用层析的方法分离多糖与蛋白,避免使用苯酚,得到精糖的蛋白含量小于1%,核酸等杂质合格,多糖回收
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