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聊一聊蛋白纯化都在讨论的质与量

是以 6 个组氨酸残基组合的融合标签，其基于蛋白质表面的组氨酸残基侧链，在中性和弱碱性条件下可以和固定化的金属离子相互作用（如 Ni 离子，Zn 离子，Co 离子等），从而达到纯化蛋白的目的。 此系统的洗脱方式可以用过三种非特异性步骤达成：① 降低 pH（4.5～6）；② 加入 EDTA；③ 不同浓度咪唑溶液（20～250 mM）。当蛋白洗脱完毕后，使用 EDTA 使纯化树脂与金属离子分离，即可完成树脂的再生。 Strep-tag® 则是基于链霉亲和素（Streptavidin）和生物素这一自然的相互

RNA甲醛变性胶电泳

，在通风橱中，加入2ml DEPC到2升去离子水中，终浓度为0.1%的DEPC。迅速盖上盖子，混匀，然后放在摇床中中速摇荡至少4hr，再高压灭菌。灭菌时将瓶盖松开，15磅灭菌20min。2、10 × FA Buffer（formaldehyde agarose buffer：200 mM的MOPs，50 mM的NaAc，10 mM的EDTA）：配制500ml，称取3.4g NaAC•3H2O放入1000ml烧杯中，加入400ml DEPC 处理过的去离子水，加入搅拌子，放在磁力搅拌器上溶解。然后加

用 CD3/CD28 做好 T 细胞激活与扩增

细胞的状态，是否形成克隆团，或进行细胞计数，如果出现培养基变黄或细胞密度过高的情况，吹散细胞克隆团后调整细胞密度至0.5-1×10^6/ml，更换培养板和培养基； 4. 移除 CD3/CD28 Streptamers 终止刺激（该步根据实验需求可选做）：直接向刺激后的细胞悬液中加入终浓度为 1mM 的 Biotin，室温孵育 30 分钟。收集并转移细胞至 15ml 离心管中，加入 10ml 培养基，300g 离心 6-10 分钟，弃上清，再次加入 10ml 培养基重复一遍洗涤步骤，至此，细胞已经可以用于