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文献和实验. 6. 10× Tango buffer (Thermo Scientifi c/Fermentas). 7. DTT (DL-Dithiothreitol; Cleland’s reagent). 8. 10 mM Adenosine 5′-triphosphate. 9. Ultrapure water (RNAse/DNAse-free). 10. Tris-EDTA (TE) buffer. 11. E. coli competent cells. Strains
medium (MCDB-131 medium with 5 ml of 200 mM L-glutamine, 10% FBS and EGM-2 SingleQuots) at 37 °C, 5% CO2 . 5) Slowly change medium every 24 hours for the first 7 days, then every other day. EPC colonies can be identified after an average
用10μl进行Southern印迹分析,每份用量约2~4μg DNA。 四、酵母基因组DNA:玻珠制备法 1.用5ml培养基在30℃下,摇床培养过夜。 2.转移培养物至13mm×100mm的玻璃离心管中,用台式离心机以1500r/min离心5分钟,收集细胞。 3.用3ml无菌水洗细胞,同上离心。 4.用500μl裂解缓冲液再次悬浮。 5.加入干净玻珠(约1.5ml Eppendorf离心管的2/3体积)和25μl的5mol/L NaCl。
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