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1. 选择合适的质粒载体
2. 设计和合成miRNA前体序列
3. 克隆miRNA前体序列
4. 验证质粒构建
5. 转染和功能验证
6. 功能研究
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文献和实验【进展|热点】JI:发现直接调控Ⅰ型干扰素表达的microRNA
抗原递呈细胞通过其表面或者胞浆内的模式识别受体识别病毒或者其它抗原,启动Ⅰ型干扰素的表达,Ⅰ型干扰素是天然免疫的重要因子,具有抑制病毒复制的功能。在病毒免疫反应中,其表达过高容易引起炎症反应和自身免疫性疾病,表达过低则不利于病原体的清除,因此,Ⅰ型干扰素的表达必须处在严格而精细的调控之中。以往对Ⅰ型干扰素负向调控机制的研究主要集中在模式识别受体信号通路上,而JI上的这篇文章则是发现了直接调控IFNβ的microRNA,在IFNβ的合成中发挥重要的转录后调控作用。 作者首先采用三种生物
miRNA干扰 质粒构建 慢病毒/腺相关病毒/腺病毒 lncRNA过表达 质粒构建 慢病毒/腺相关病毒/腺病毒 lncRNA干扰 质粒构建 慢病毒/腺相关病毒/腺病毒 lncRNA敲除 质粒构建 慢病毒/腺相关病毒/腺病毒 circRNA过表达 质粒构建 慢病毒/腺相关病毒/腺病毒 circRNA干扰 质粒构建 慢病毒/腺相关病毒
个双链 RNA 特异的核酸酶 Dicer 剪切,得到 19-23 个 核苷酸组成的成熟的 miRNA ,结合在与 RNA 介导的沉默复合物( RISC )类似或者相同的复合物中,这个复合物参与了 RNA 干扰。由 miRNA 和靶基因 mRNA 的碱基配对引导 RISC 降解目的片段或是阻碍其翻译过程 。 miRNA 和它的目的 mRNA 互补的碱基配对决定了这个过程的特异性。通过抑制翻译还是降解发挥作用是由 miRNA 和它的目的 mRNA 之间的错配程度决定的,匹配程度高的目的 mRNA 将被降解
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