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原核有参转录组测序是一种基于高通量测序技术的研究方法,用于分析原核生物在特定条件下转录出的所有mRNA。
服务流程
1. 样本准备:提取总RNA,确保RNA完整性(RIN值 > 7)和浓度≥1μg。采用磁珠法去除rRNA,保证rRNA去除效率和数据质量。
2. 文库构建:构建链特异性文库,确保建库稳定性。
3. 高通量测序:使用Illumina NovaSeq等高通量测序平台进行测序,采用PE150测序策略,保证数据质量(Q30≥85%)测序完成后,获得原始数据文件(FASTQ格式)。
4. 数据分析:
- 数据预处理:过滤低质量序列。
- 比对到参考基因组:使用比对工具将测序数据比对到参考基因组。
- 基因表达量分析:包括基因表达量定量、差异基因分析、富集分析等。
- 基因结构分析:包括UTR分析、新转录本预测、反义转录本分析等。
- 非编码RNA分析:鉴定sRNA及其与mRNA的互作关系。
- 功能注释:GO功能注释、KEGG功能注释、COG功能注释。
应用方向
1. 基因表达调控研究:揭示不同生长条件、环境压力或基因突变下基因的表达变化。
2. 环境响应研究:分析原核生物对温度、pH、营养等环境变化的响应。
3. 细菌感染机制研究:研究病原体与宿主细胞相互作用时的基因表达变化。
4. 抗生素抗性研究:研究抗生素作用下细菌的基因表达变化。
5. 代谢途径分析:分析基因在代谢途径中的表达情况。
6. 细胞周期和生长调控研究:研究细菌的生长周期、分裂和细胞周期调控。
7. 生态学和微生物组学研究:研究微生物群落中不同成员的基因表达。
8. 基因功能鉴定和新基因发现:识别编码蛋白质的基因以及潜在的新基因。
9. 基因调控网络分析:构建基因调控网络,了解基因之间的调控关系。
原核有参转录组测序服务具有样本起始量低、周期快、质量好、稳定性高的优势,并且可以同时分析mRNA和sRNA。
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