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文献和实验仪(Perkin Elmer 9600s and9700s)中完成的。扩增的实验参数取决于所用的模板和引物的类型,然而限定PCR的模板、引物、dNTP、镁离子、标准缓冲液和酶是十分重要的。一般附加剂如甘油或明胶因改变表面张力或竞争玻片表面的附着位点而影响点片过程,应避免使用。 点样DNA的制备:为了纯化PCR产物以制备点样DNA,我们一般用异丙醇沉淀PCR产物,然后在3× SSC中以大约100 ng/µl的浓度重新悬浮DNA。沉淀既能在PCR孔板中又能在V型底96孔组织培养板中进行。首先在每孔中加入10µl
效率,比如电转化比化学转化的效率更高。 3. 如何设计目的片段引物? PCR 引物设计,是决定实验是否成功的重要一环,现有的 PCR 设计工具,比如Primer-BLAST (NCBI)、Primer Designer Tool (Thermo Fisher)、 Primer3 等都可以针对目标序列设计出相应的引物,可以根据目标序列特征、实验室资源来选择合适的引物设计工具。如果后续通过无缝克隆的方法构建载体,在设计 PCR 引物时,还需要将同源臂序列添加到上下游引物的两端。具体添加方法可参考所用的同源
类:· Serine proteases· Cysteine proteases· Aspartic acid proteases· Zinc metalloproteases图示:比色蛋白酶试验响应曲线。采用 Thermo Scientific Pierce 比色法蛋白酶检测试剂盒,通过与提供的胰蛋白酶标准品进行比较,测定 V-8 蛋白酶和颌下腺蛋白酶消化酪蛋白底物的活性。以上即为PTMs的概述(资料来自Thermo Fisher官网),欢迎留言评论
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