内切酶 SspDI (KasI)

 

SspDI (KasI)内切酶

货号：F4514S

储存条件：-20℃

 

同裂酶：KasI, DinI, EgeI, EheI, Mly113I, NarI, PluTI, SfoI；注：同裂酶对于不同的甲基化修饰可能具有不同敏感性。

产品组成

组分	规格
SspDI (KasI)（10U/μl）	25 μl
10× LabFD Buffer	1 ml
10× LabFD color Buffer	1 ml

 

产品简介

SspDI属于常规限制酶系列，可识别G^GCGCC序列。不同于LabFD系列快速内切酶，SspDI需要较长时间酶切以实现DNA底物的完全切割，但该酶仍使用LabFD限制酶通用反应缓冲液LabFD Buffer，可实现双酶切。

建议反应条件

1×LabFD buffer；37℃温育；参照“DNA快速酶切流程”配制反应体系。

失活条件

80℃温育20 min。

活性定义

1 活性单位 (U) 是指在 50 μl 反应体系中，37℃ 1 h 内完全酶切1 μg pBR322所需的酶量。

质量控制

超长时间温育检测

最适反应温度下，将10 U SspDI 与1 μg λDNA共同温育16 h，未检测到其他核酸酶污染或星号活性引起的底物非特异性降解。

酶切-连接-再酶切检测

最适反应温度下，使用10 U SspDI消化底物，回收酶切产物。在22℃下使用适量 T4 DNA Ligase (Fast)可以将酶切产物重新连接。将连接产物再次回收后，使用相同的内切酶可以重新切开连接产物。

 

 

 

使用方法

1. DNA快速酶切流程

1) 在冰上按如下建议的加样顺序配制反应体系：

ddH2O	up to 50ul
10×LabFD Buffer	5ul
底物DNAa	1ug
SspDI（10U/ul）	1ul
Total	50ul

a. DNA底物中应不含苯酚、氯仿、乙醇、EDTA、洗涤剂或高浓度盐，否则将会影响SspDI 酶活性；

2) 轻柔吸打或轻弹管壁以混匀（切勿涡旋），然后瞬时离心以收集挂壁液滴。

3) 37℃温育1 h~6 h

4) 80℃温育20 min 即可使酶失活，停止反应，或者通过吸附柱或苯酚/氯仿纯化终止反应。

 

2. 注意事项

1) 反应体系中加入的酶体积不应超过总体积的10%，避免酶中过多的甘油引起星号活性；

2) 限制性内切酶存储缓冲液中的添加剂（例如甘油、盐）与底物溶液中的污染物（例如盐、EDTA或乙醇等）相同，反应体积越小，酶切反应抑制效应越强。

不同DNA中的酶切位点数量

甲基化修饰影响

在不同反应缓冲液中的活性

注：活性数据来自LABLEAD限制酶标准反应体系下的检测。