用于蛋白质纯化的分子筛层析

用于蛋白质纯化的分子筛层析是一种基于分子大小和形状差异进行分离的技术。在蛋白质组学研究中，蛋白质的纯化是一个重要步骤，因为它直接影响到后续分析的准确性和可靠性。分子筛层析，又称凝胶过滤层析，是利用多孔填料的分离介质，将蛋白质混合物中不同分子量的蛋白质分离开来。用于蛋白质纯化的分子筛层析通过使用一系列多孔球状颗粒充填的柱子，让溶液中的分子经过这些颗粒时，根据其分子大小的不同而被不同程度地阻滞。较大的分子无法进入颗粒的孔隙，因此会更快地流出柱子；而较小的分子则会进入这些孔隙，从而延迟其流出时间。分子筛层析技术在蛋白质组学、酶学研究、药物开发以及生物分离技术中有着广泛的应用，其作用不仅限于蛋白质的分离和纯化，还涉及到分子量测定、蛋白质复合物的结构研究等。为了达到高效的蛋白质分离效果，研究人员常常会针对具体的实验需求选择合适的分子筛材料和操作条件。用于蛋白质纯化的分子筛层析可以在温和的缓冲条件下操作，避免了蛋白质变性或活性丧失的风险。通过调整缓冲液的pH值、离子强度和流速等参数，实验人员能够优化分离条件，提高分离效果。该技术的高分辨率和高回收率使其成为蛋白质纯化过程中的关键工具。同时，分子筛层析还可以与其他分离技术，如离子交换层析、亲和层析等结合使用，实现更加复杂的分离任务。

 

一、优缺点

1.用于蛋白质纯化的分子筛层析的优点：

（1）高效性：能够在短时间内实现蛋白质的高效分离。

（2）温和条件：在温和的生理条件下操作，不破坏蛋白质的天然构象。

（3）简便性：操作相对简单，不需要复杂的设备。

 

2.用于蛋白质纯化的分子筛层析的缺点：

（1）分辨率有限：对于大小相近的分子，分辨率可能不足。

（2）样品损失：在样品预处理和加载过程中可能会有样品损失。

（3）柱容量限制：一次分离的样品量受限于柱的容量。

 

二、实验注意事项

在进行用于蛋白质纯化的分子筛层析实验时，需注意以下几点以保证实验的成功：

1.样品的稳定性

确保蛋白质在实验过程中不发生变性或降解。选择合适的缓冲液和温度条件，以保持蛋白质的活性。

 

2.柱子的选择和维护

选择适合的凝胶颗粒和柱子尺寸，以获得最佳的分离效果。在使用后应仔细清洗和储存柱子，以延长其使用寿命。

 

3.实验参数的优化

根据不同蛋白质的特性，优化流速、样品体积和洗脱缓冲液的组成，以提高分离效率。

 

百泰派克生物科技拥有丰富的经验和专业的技术，可以根据客户的特定需求量身定制纯化方案，确保样品的纯度和收率达到最佳。无论是基础研究还是应用开发，我们都能提供高效、可靠的蛋白质纯化服务，帮助客户加速科研进程并提高研究成果的质量。

 

百泰派克生物科技--生物制品表征，多组学生物质谱检测优质服务商

 

相关服务：

蛋白质纯度分析（分子筛/反相色谱）

 

 

其他相关服务

 

 

特色项目

 

一、蛋白测序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos质谱仪及岛津公司埃德曼降解测序系统对蛋白质序列进行分析，提供基于质谱的蛋白测序分析服务，包括对蛋白质的氨基酸组成分析，N端测序，C端测序和全序列分析，以及基于埃德曼降解的蛋白质N端序列分析服务。对于未知理论序列的蛋白质，提供基于从头测序法的蛋白质从头测序服务，对蛋白序列进行分析。

 

※服务优势：

1.采用目前世界上先进的质谱仪器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可实现对所测定靶蛋白序列 100% 的覆盖;

3.可测定蛋白N端多达 70个氨基酸序列;

4.可测定多种形式的样品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白条带;

5.样品用量低: 蛋白样品仅需 5-10ug，即可完成检测;

6.测序不受N端封闭，PEC和和糖基化等N端修饰的影响。

 

 

二、蛋白质组学

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos质谱平台结合Nano-LC，提供定量蛋白质组学、靶向蛋白质组学、多肽组学、翻译后修饰蛋白组学等多种蛋白质组学分析服务。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4D蛋白质组学服务，助力微量样本蛋白组学、大样本群医学及高通量修饰组学等研究工作。

 

※服务优势：

1 .高通量定量蛋白分析:多对照组大规模实验分析，发现新的生物标记物;

2.体内体外多种蛋白质标记方法，适用于分析组织、细胞、血液等多种样品;

3.质谱分析灵敏度高，实验结果重复度高;

4.可检测较低丰度蛋白，线性范围广;

5.专业生物信息学分析，分析更系统准确。

 

 

三、单细胞质谱流式技术分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm质谱流式系统进行单细胞质谱流式技术分析，采用金属元素标记物（通常是金属元素标记的特异抗体）标记细胞表面和内部的分子，然后用流式细胞原理分离单个细胞，再用电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）分析单个细胞的原子质量谱，最后将原子质量谱数据转换为细胞表面和内部的信号分子表达量。

 

※服务优势：

1.技术先进，填补技术空白

采用金属标记抗体技术，避免了传统流式荧光通道少且易相互影响的问题。可在单细胞层面上对多种指标同时进行表征，百泰派克生物科技可做到同时检测51个目标蛋白。

2.分析数量大，成本较低

单细胞RNAseq受成本等因素限制，所有样本细胞汇总的分析数目一般在2x10^4个左右，而流式质谱技术一次（单样本）就可分析至少10^5的细胞，实现了数量级的提高，且成本不高于单细胞RNAseq。

3.应用前景大

①流式质谱结果可以给出细胞亚群的变化，在临床诊断、疾病机制研究等方面具有极大的研究前景；

②将金属标签技术与其他技术结合会有新应用方向。除常规蛋白外，质谱流式细胞技术还可用于蛋白翻译后修饰；

③可检测细胞存活率、细胞大小、mRNA转录子表达量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

 

 

四、基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现

百泰派克生物科技的基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现一站式解决方案包括我们专有的、高度敏感的免疫肽富集和鉴定方案。我们能够帮助您实现10,000个以上I型多肽和10,000个以上II型多肽的鉴定和识别。通过我们优化的高通量免疫多肽组学分析平台进行免疫肽组学分析，可从最小的样品材料中进行可重复的识别和定量。该服务可以应用于大规模的研究，旨在助力科研工作者寻找癌症、免疫疾病及传染病的解决方案，深入挖掘未知的靶标。

 

 

五、生物药物表征

百泰派克基于高分辨率质谱技术，MALDI TOF，高效色谱分离技术，提供一系列完善的生物药物分析方案，从蛋白质、多肽、抗体、疫苗等生物制品的氨基酸组成和一级结构分析，到产品变异性和纯度分析。旨在提供优质生物药物分析服务，帮助生物医药生产商提高生物药物品质。

 

 

六、基因敲除

百泰派克生物科技（BTP）采用优化的CRISPR/Cas9系统为您提供高通量基因敲除服务，包括病毒包装、质粒制备、Cas9浓度测试等，为您解决选择哪个细胞进行敲除、可不可以敲除、如何敲除以及敲除效率如何等关键问题。可进行单/多基因敲除、移码突变和大序列敲除。我们的人全基因组基因敲除阵列Array文库覆盖了完整的人类全基因组，全基因组阵列敲除库已在人原代细胞全部完成高内涵筛选的验证，超过80%以上的靶点达到70%以上的敲除效率。

 

※服务优势：

1.样本适用性强

适用于人、小鼠的细胞系，原代细胞，免疫细胞及iPS细胞等。

2.基因必要性及表达量分析

在进行基因敲除实验前，我们会基于生物信息学和蛋白质组学数据对不同细胞中基因必要性及表达量进行分析，确保实验的可行性，降低实验风险。

3.gRNA无需从头设计和验证

我们完成了人类全基因组gRNA的全部验证，与药物相关的靶点也完成了PCR测序验证，无需针对客户的靶点设计预实验进行gRNA验证，大大缩短了项目周期。

4.高通量高效率

我们采用优化的CRISPR/Cas9系统进行高通量基因敲除，多个sgRNA/靶基因设计保证高敲除效率，超过80%靶点敲除效率在70%以上，短期内（10天内）即可提供高敲除效率的KO pool，满足绝大多数的应用场景。

5.敲除效率双验证

基因敲除后，我们采用WB实验中抗体KO验证的shǒuxuǎn方法——Sanger测序和深度蛋白质组学技术对敲除效率进行双验证，数据真实性的双重保障。

 

 

百泰派克生物科技七大检测平台

 

 

 

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物质谱多组学优质服务商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于为生物/制药和医疗器械行业提供质量控制检测和项目验证等专业服务。公司实验室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法规和指导原则，通过CNAS/ISO9001双重质量体系认证，建立了完备的质量体系，数据冷热/异地备份，设备定期计量/期间核查，软件审计追踪，为客户提供一体化解决方案和技术服务，支持新药研发、药物申报注册和生产放行。

1.公司采用ISO9001质量控制体系，专业提供以质谱为基础的CRO检测分析服务；

2.获国家CNAS实验室认可，为客户提供符合全球药政法规的药物质量研究服务；

3.业务范围覆盖蛋白质组学、多肽组学、代谢组学、生物药物表征、单细胞分析、单细胞质谱流式、生信云分析以及多组学生物质谱整合分析等；

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