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- Axygen
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- PCR-02D-L-C
- 2025年08月11日
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文献和实验-ＧＴＴＣＴＴＴＧＡＡＡＡＣＴＧＡＡＴ-3′，Ｒ2 5′-ＧＣＡＴＣＣＡＣＣＡＡＡＡＡＣＴＣＴ-3′。ＰＣＲ反应体系和条件：10×缓冲液(10ｍＭＴｒｉｓ-ＨＣｌ、500ｍＭＫＣｌ、20ｍＭＭｇＣｌ2、0.01%明胶)、ＰｒｉｍｅｒＦ1、Ｒ1、Ｆ2、Ｒ2的浓度为2ｎｍｏｌ/μＬ、2.5ｍＭｄ ＮＴＰｓ、Ｔａｑ酶、Ｈ2Ｏ、石蜡油覆盖。反应温度和时间为:94℃/2ｍｉｎ预变性、94℃/30ｓ变性、55℃/1ｍｉｎ退火、72℃/1ｍｉｎ延伸,循环30次后72℃延伸5ｍｉｎ。第1次ＰＣＲ反应取模板10μＬ,第2次ＰＣＲ反应以第1次ＰＣＲ
后,加入0.2ml氯仿,快速摇动15s,室温静置2～3min。3、于2～8℃离心14600r/min×15min,上层无色水相(RNA溶于此层中)约占整个细胞匀浆液的60％。4、小心吸取其中400μｌ移至另一Eppendorf管中,加入0.5ml异丙醇,轻柔混匀,室温静置5～10min后。5、于2～8℃离心14600r／min×10min,在管壁下底处可见一乳白色小沉淀块,即为RNA。弃上清。6. 用冰冷的75％乙醇1ml洗RNA沉淀(不用吹打沉淀),然后于2～8℃,11500r/min离心
培养液内。谷氨酰胺使用终浓度为0.002mol/L。一般配制为100倍浓缩液，即浓度为200mmol/L（29.22g/L），配制时应加温30℃，完全溶解后过滤除菌，分装至小瓶，储存于－20℃。使用时，在每100ml培养液中加入0.5~2ml谷氨酰胺浓缩液，终浓度为1~4mmol/L。 六、二肽谷氨酰胺（L-丙氨酰-L-谷氨酰胺） 在细胞培养液中L-谷氨酰胺是大部分细胞培养基的基本成分；而L-谷氨酰胺是一种并不稳定的氨基酸，在中性的水溶液中会自发降解；需要频繁地补加L-谷氨酰胺。因而在培养操作过程中
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