IP9270 PBS-BSA溶液（0.1%BSA，无菌） 实

一篇搞定 IP、co-IP 实验

或者互作蛋白复合物（红色+黄色）洗脱 Step 5：分析检测—Western Blot 或者质谱 常用“黑话” 以上示例图证明了 EDR1 和 EDR4 有相互作用。如果想要设计好实验，先清楚以下常用“黑话”含义。 阳性对照：证实细胞裂解物中确实存在靶蛋白（IP）或者互作蛋白对（co-IP，比如诱饵蛋白X和靶蛋白 Y），即为常说的 input。可直接取抽好的蛋白溶液进行 Western。 阴性对照：用来排除假阳性。IP/co-IP 后靶蛋白或者互作蛋白对都检测到了，固然是值得高兴

【求助】co-IP

了，要分开难度还是很大，这时候就要很慎重，实验过程要十分肯定检测有这么一条目的条带才行。最好还是能找到不同来源的抗体啦~~ hiqihong 不同种源的抗体WB验证有时在IgG位置也出现条带 最好的办法是用洗脱buffer洗脱 如果是用tag做的IP 则用tag肽洗脱，IgG是能洗掉的 devil19840 紫叶竹韵 wrote: 做IP，之后Western 分析，看到有两条带

Western 实验步骤

BSA 蛋白标准液、BCA 试剂、PBS。 1) 标准曲线：用 BSA 和 PBS 混合总体积为 20 μL 的溶液做标准曲线，具体操作如下:按照 0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 含量稀释 BSA 蛋白标准品，每个浓度（0、4 μL、8 μL、12 μL、16 μL、20 μLBSA，其余用 PBS 补齐至 20 μL）梯度做一个复孔。 2) 样品稀释测蛋白浓度：10 倍稀释法：取 18 μLPBS+2 μL 样品上清（经上步处理的样品 12000 r/min 离心 5 min