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文献和实验一、反应曲线 首先,我们了解一下化学反应的时间与吸光度一个曲线图,可以划分为四个区:延迟区、等速区、过渡区和平衡区,如下图所示: 二、反应原理 对于延迟区来讲,无规律可寻,对于指标检测没有意义。 等速区对应的指标检测方法是速率法。速率法又称连续监测法,是在测定酶活性或用酶法测定代谢产物时,连续选取时间-吸光度曲线中线性期内4个以上测光点作为读数点,并以单位时间吸光度变化值计算结果。线性期就是此期间内各测光点之间的吸光度差值相等,此线性期对酶促反应的底物来说属于零级反应。其测光点一般设置在加入
收到的能量较少。这样可以减少紫外线对核酸的损害,但也会降低凝胶条带的信号。另一方面,透射仪器可为条带提供更高的信号,但由于辐射接近凝胶,会增加紫外线造成的伤害。 图 5. 反射照明器和透射仪 b. 放射自显影法 在放射性核酸的电泳过程中,凝胶电泳后会暴露在 x 射线胶片上,这一过程即称为放射自显影法。条带辐射的强度可用光密度测定来定量。 参考文献 1.Stellwagen NC (1998) DNA Gel Electrophoresis. In: Tietz D (editor
CTAB 法 ①取0. 2g 各中药材样品分别用液氮( Ⅰ) 、玻璃砂( Ⅱ) 、氧化铝( Ⅲ) 研磨。②加入56 ℃ 10 倍预热的缓冲液C 于56 ℃温育30 min , 离心, 取上清液加入等体积氯仿- 异戊醇(24∶1) 抽提(室温, 不能低于15 ℃, 否则CTAB 会沉淀) , 10 000g 离心15 min。③取上清液加入1/ 10 倍体积缓冲液D , 于室温下放置15 min , 再用等体积氯仿- 异戊醇(24∶1) 抽提1 次。④上清液加入缓冲液C 于室温下放置6h
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