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文献和实验一、反应曲线 首先,我们了解一下化学反应的时间与吸光度一个曲线图,可以划分为四个区:延迟区、等速区、过渡区和平衡区,如下图所示: 二、反应原理 对于延迟区来讲,无规律可寻,对于指标检测没有意义。 等速区对应的指标检测方法是速率法。速率法又称连续监测法,是在测定酶活性或用酶法测定代谢产物时,连续选取时间-吸光度曲线中线性期内4个以上测光点作为读数点,并以单位时间吸光度变化值计算结果。线性期就是此期间内各测光点之间的吸光度差值相等,此线性期对酶促反应的底物来说属于零级反应。其测光点一般设置在加入
亲和素―生物素―过氧化物酶复合物法亲和素―生物素―过氧化物酶复合物法(avidin-biotin-pcroxidase complex method,ABC法)的特点是将亲和素作为“桥"与生物素化的抗体和生物素结合的酶连接起来,使抗原与抗体反应信号放大,以增加敏感性。由于该法是以物质对某种组织成分具有高度亲和力为基础,一方面区别于古老的组织化学分解、置换、氧化和还原反应,另一方面本质上又是非抗原抗体反应,因此,Bayer(1976年)首次称之为亲和组织化学(affinity
链霉菌抗生物素蛋白―过氧化物酶法 ABC法虽然是一种很好的方法,但是在实际应用过程中.确实也存在许多问题,如亲和 素中含有约?%的糖类,它可与组织中含糖基的物质起反应,造成背景着色。亲和素的等电 点约为10左右。可带较多的负电荷,纤维组织可带较多的正电荷,这两种电荷可互相吸引,造成背景着色。亲和素中有4个结合点,其中一半与连接抗体结合,另一半与复合物结合,如此可降低其敏感性。 为解决和克服存在的问题,20世纪90年代初提出了用链霉亲和素(streptavidin)替代ABC
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