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文献和实验最近的一些分子生物学进展使得一些生物技术工具极大提高了生物发光和化学发光的检测和快速应用。这些发展方便了体外和体内持续检测生物过程(如基因表达,蛋白质-蛋白质相互间作用和疾病的进程),可应用于临床、诊断、和药物开发等。而且,结合发光酶或某些在基因水平有生物特异结合位点的发光蛋白发展了超敏感和选择性的生物分析工具,如重组细胞生物传感器,免疫分析和核酸杂交系统。发光分析信号的高度可侦测性使得它非常适合于微小化的生物分析装置(如微矩阵,微流设备和高密度的微孔板)以用于小量样品体积的基因和蛋白的高通
一、反应曲线 首先,我们了解一下化学反应的时间与吸光度一个曲线图,可以划分为四个区:延迟区、等速区、过渡区和平衡区,如下图所示: 二、反应原理 对于延迟区来讲,无规律可寻,对于指标检测没有意义。 等速区对应的指标检测方法是速率法。速率法又称连续监测法,是在测定酶活性或用酶法测定代谢产物时,连续选取时间-吸光度曲线中线性期内4个以上测光点作为读数点,并以单位时间吸光度变化值计算结果。线性期就是此期间内各测光点之间的吸光度差值相等,此线性期对酶促反应的底物来说属于零级反应。其测光点一般设置在加入
【原创】暗室实验(化学发光底物检测方法)及Western Blot实验优化方法
的斑点印迹的操作方法。 注:所有的抗体稀释度假定起始浓度为1 mg/mL。 1. 用TBS 和PBS 稀释的蛋白样品,好的稀释方法是由样品中的抗原稀释浓度决定的,但是由于抗原的浓度是未 知的, 所以有必要进行宽范围的稀释度的检测。SuperSignal West Pic 化学发光底物的检测灵敏度可达皮g 水平,所以样品的稀释范围可以从微克水平到皮克水平。如果要使用过多的抗原,结果会出现以下情况:非特异性条带、模糊条带和信号降低。 2. 准备转印膜。所需膜的数量依赖于被屏蔽的一抗和/或二抗
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