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文献和实验一、反应曲线 首先,我们了解一下化学反应的时间与吸光度一个曲线图,可以划分为四个区:延迟区、等速区、过渡区和平衡区,如下图所示: 二、反应原理 对于延迟区来讲,无规律可寻,对于指标检测没有意义。 等速区对应的指标检测方法是速率法。速率法又称连续监测法,是在测定酶活性或用酶法测定代谢产物时,连续选取时间-吸光度曲线中线性期内4个以上测光点作为读数点,并以单位时间吸光度变化值计算结果。线性期就是此期间内各测光点之间的吸光度差值相等,此线性期对酶促反应的底物来说属于零级反应。其测光点一般设置在加入
105重悬的细胞,300 g离心5 min,弃上清。加入500 μL稀释成1 ×的Annexin V Binding Buffer工作液重悬细胞。 细胞悬液中加入5 μL的荧光素标记-Annexin V和5 μL的细胞核染色液。 轻柔涡旋混匀后,室温避光孵育15~20 min。 反应完成后立即上机检测。如不能及时检测,请于冰上避光静置并于1 h内完成检测。 检测 1)流式细胞仪检测 处理好的样本在流式细胞仪上检测。 2)荧光显微镜分析 取一滴用荧光素-Annexin V/细胞核染色液双染的细胞
酶联免疫技术是将抗原抗体反应的特异性与酶促反应的专一性和敏感性结合而形成的一种方法。这是一种固相酶免疫检测技术,始创于1971年。它既可用于测定抗原,又可用于测定抗体。其敏感性高,特异性强,已成为酶免疫技术中应用最广泛的一种方法。本实验以双抗夹心法检测乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)为例 【实验目的】 通过本实验的学习,了解酶联免疫吸附的基本原理及其用途,并熟悉其操作步骤与技能。 【实验原理】 酶联免疫吸附试验是以免疫学反应为基础,将酶(如辣根过氧化物酶,HRP)标记
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